Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.
1. Exécution du test
REMARQUE : Ne laissez pas les sections se dessécher entre les étapes d’incubation.
- Hybridation de la sonde HPV
REMARQUE : Assurez-vous que les sondes sont préchauffées pour dissoudre toute précipitation avant utilisation. Pour cette étape, au lieu de la sonde HPV, la peptidyl-prolyl isomérase B (PPIB) pour le contrôle positif ou la dihydrodipicolinate réductase (DAPB) pour le contrôle négatif (voir le tableau des matériaux) peuvent également être utilisées.
- Tapotez et/ou effleurez les lames pour éliminer tout excès de liquide et placez-les dans le support de diapositives. Ajoutez ~4 gouttes de sonde HPV pour couvrir entièrement chaque section.
- Couvrez la plaque avec un couvercle et insérez-la dans le four pendant 2 h à 40 °C.
REMARQUE : Pour éviter l’évaporation, assurez-vous que le bouton de rotation est complètement tourné en position de verrouillage.
- Sortez la plaque du four et retirez la grille coulissante.
- Une lame à la fois, retirez rapidement tout excès de liquide et placez la lame dans un support à glissières immergé dans un plat de coloration rempli de 1x tampon de lavage.
- Lavez les lames dans 1x tampon de lavage pendant 2 min à température ambiante avec une agitation constante. Répétez cette opération avec 1x tampon de lavage frais.
- Hybridation d’AMP1, AMP2, AMP3 et AMP4
REMARQUE : Ces étapes comprennent l’hybridation dans le four d’hybridation et AMP1-AMP4 à partir du kit acheté (voir le tableau des matériaux).
- Tapotez et/ou effleurez pour retirer tout excès de liquide des lames et placez-les dans le support à glissières. Ajoutez ~4 gouttes d’AMP1 pour couvrir entièrement chaque section.
- Couvrez la plaque avec un couvercle et insérez-la dans le four pendant 30 min à 40 °C.
- Sortez la plaque du four et retirez la grille coulissante.
- Une lame à la fois, retirez rapidement tout excès de liquide et placez la lame dans un support à glissières immergé dans un plat de coloration rempli de 1x tampon de lavage.
- Lavez les lames dans 1x tampon de lavage pendant 2 min à température ambiante avec une agitation constante. Répétez cette opération avec 1x tampon de lavage frais.
- Répétez les étapes 1.2.1 à 1.2.5, mais utilisez ~4 gouttes d’AMP2 au lieu d’AMP1 et incubez pendant 15 min à 40 °C. Lavez les lames 2 fois pendant 2 min, les deux fois dans un tampon de lavage frais.
- Répétez les étapes 1.2.1 à 1.2.5, mais utilisez ~4 gouttes d’AMP3 au lieu d’AMP1 et incubez pendant 30 min à 40 °C. Lavez les lames 2 fois pendant 2 min, les deux fois dans un tampon de lavage frais.
- Répétez les étapes 1.2.1 à 1.2.5, mais utilisez ~4 gouttes d’AMP4 au lieu d’AMP1 et incubez pendant 15 min à 40 °C. Lavez les lames 2 fois pendant 2 minutes, les deux fois dans un tampon de lavage frais.
- Hybridation des AMP5 et AMP6
REMARQUE : Ces étapes n’incluent pas l’hybridation au four mais l’hybridation à température ambiante. AMP5 et AMP6 proviennent du kit acheté (voir le tableau des matériaux).
- Tapotez et/ou effleurez les lames pour éliminer tout excès de liquide et placez-les dans le support de diapositives. Ajoutez ~4 gouttes d’AMP5 pour couvrir entièrement chaque section.
- Couvrez le plateau avec un couvercle et laissez incuber pendant 30 min à température ambiante.
- Une lame à la fois, retirez rapidement tout excès de liquide et placez-la dans un support à lames immergé dans un plat taché rempli de 1x tampon de lavage.
- Lavez les lames dans 1x tampon de lavage pendant 2 min à température ambiante avec une agitation constante. Répétez cette opération avec 1x tampon de lavage frais.
- Répétez les étapes 1.3.1 à 1.3.4, mais utilisez ~4 gouttes d’AMP6 au lieu d’AMP5 et incubez pendant 15 min à température ambiante. Lavez les lames 2 fois pendant 2 min, les deux fois dans un tampon de lavage frais.
