Récolte de la membrane chorioallantoïde du poulet : une méthode pour isoler la membrane chorioallantoïde porteuse d’une tumeur à partir d’un œuf de poule

Résumé

Source : Schmidt, L. B. et al. Le modèle in vivo de la membrane chorioallantoïde du poussin pour évaluer l’invasion périneurale dans le cancer de la tête et du cou. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo démontre l’isolement de la membrane chorioallantoïde porteuse de la tumeur à partir de l’embryon de poulet. Le CAM récolté peut être utilisé pour d’autres applications en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Récolte du CAM

1. Préparez des assiettes à 6 puits avec 4 % de PFA (paraformaldéhyde) pH 7,0 ; un puits par œuf, 2 ml par puits.
2. Apportez les œufs sur une paillasse de laboratoire. À l’aide d’une aiguille fixée à une seringue pour perforer le film de pansement, déposez environ 300 μL de PFA sur le CAM pour rigidifier légèrement le CAM, facilitant ainsi le processus de récolte. Répétez cette opération pour tous les œufs.
3. À l’aide de ciseaux, retirez la moitié supérieure de la coquille de l’œuf (où se trouve la fenêtre de fonctionnement) à l’aide de la came (Figure 1I). Réduisez la taille de cette moitié à environ 3 cm de diamètre. Saisissez le CAM à l’aide d’une pince fine et détachez-le de la coquille de l’œuf tout en le plaçant dans le PFA.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
PFA (solution de paraformaldéhyde)	Sigma-Aldrich	# P6148-1KG	Diluer dans l’eau pour obtenir une solution de PFA à 4 %
Ciseaux chirurgicaux fins droits tranchants	Outils scientifiques fins (FST)	Réf. 14060-09	Utilisé pour prélever le tissu CAM le jour 17
Œufs de Lohmann White Leghorn fécondés			Ovules fécondés aux premiers jours de la fécondation, de préférence le premier jour après la fécondation. Les œufs utilisés dans ce protocole proviennent de la ferme avicole de l’Université d’État du Michigan
Pince Graefe extra fine, droite	Outils scientifiques fins (FST)	# 11150-10	Utilisé pour greffer du DRG sur le CAM le jour 8 et pour prélever du tissu CAM le jour 17