Inoculation orthotopique de cellules cancéreuses de la thyroïde dans la thyroïde murine : une procédure pour établir un modèle murin de cancer de la thyroïde orthotopique

Résumé

Source : Julia Ramirez-Moya, et al. Inhibition in vivo des microARN pour diminuer la croissance tumorale chez la souris. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo décrit la procédure d’inoculation orthotopique de cellules cancéreuses de la thyroïde dans la glande thyroïde de modèles murins, qui peut ensuite servir de plate-forme précieuse pour évaluer la cancérogenèse et découvrir des stratégies de traitement potentielles.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Inoculation orthotopique thyroïdienne des cellules

1. Préparation cellulaire
   1. Concevoir une lignée cellulaire de cancer de la thyroïde humaine Cal62 pour surexprimer une construction transgénique qui exprime constitutivement la GFP et la luciférase. Sélectionnez les cellules transgéniques en fonction de leur résistance aux antibiotiques ou en triant les cellules positives à la GFP par cytométrie en flux.
   2. Cultivez ces cellules dans du DMEM complété par des antibiotiques (pénicilline et streptomycine) et 10 % de FBS à 37 °C et 5 % de CO₂.
   3. Mettre en suspension 1 x 10⁵ cellules dans 5 μL de PBS.
2. Inoculation cellulaire dans la glande thyroïde de souris
   1. Injecter 100 μL d’analgésique (buprénorphine) et 100 μL d’antibiotique (céphalosporine) par voie sous-cutanée chez des souris BALB/c nu/nu âgées de 7 semaines. Désinfecter le site d’injection avec de l’alcool.
   2. Injectez 5 μL de la solution cellulaire dans la glande thyroïde des souris.
      1. Anesthésie la souris à l’aide d’isoflurane à 3 % mélangé à de l’oxygène et place-la sous un stéréomicroscope dans une armoire à écoulement stérile. Évalue le niveau d’anesthésie par réflexe de pédale (pincement ferme de l’orteil) et ajuste l’administration de l’anesthésique au besoin pour maintenir le plan chirurgical.
      2. Appliquez une pommade ophtalmique sur les deux yeux pour prévenir la dessiccation.
      3. Pour chaque souris, désinfectez le cou avec de l’iodopovidone et faites une incision d’environ 2 cm dans la peau avec des ciseaux. Une fois ouvert, exposez le cou en déplaçant les glandes salivaires.
      4. Disséquez les muscles de la sangle à l’aide d’une pince de dissection et/ou de ciseaux pour exposer la trachée et la glande thyroïde. À l’aide d’une seringue de 10 μL, injecter 5 μL de la solution cellulaire dans le lobule thyroïdien droit, situé sur le côté du cartilage cricoïde.
      5. Repositionnez les glandes salivaires et suturez l’incision avec de la soie à l’aide de sutures tressées, enduites et non résorbables.
      6. Ajoutez de l’iodopovidone dans la zone de la plaie et placez la souris sur une couverture thermique pendant qu’elle se remet de l’anesthésie.
   3. Le lendemain de la chirurgie, injecter un analgésique sous-cutané (buprénorphine) et ajouter 3 ml d’ibuprofène liquide (40 mg/ml) dans 250 ml d’eau potable pendant 1 semaine.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Matrice de membrane basale : Matrice de membrane basale Matrigel haute concentration	Corning	#354248
Réactif d’administration in vivo : Réactif Invivofectamine 3.0	Thermo Fisher	IVF3005
Logiciel d’imagerie in vivo : Système d’imagerie IVIS-Lumina II	Pied à coulisse Sciences de la vie