Intégration de sphéroïdes 3D dans des gouttes de gel d’agarose : une technique pour préserver les sphéroïdes pour l’analyse en aval

Résumé

Source : Rolver, M. G. et al. Évaluation de la viabilité et de la mort cellulaires dans des cultures sphéroïdes 3D de cellules cancéreuses. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo décrit la technique d’intégration de sphéroïdes 3D dans des gouttes de gel d’agarose pour la conservation. Les sphéroïdes 3D intégrés peuvent être utilisés pour l’analyse en aval.

Protocole

1. Intégration de sphéroïdes 3D

1. Préparez le gel d’agarose dans lequel les sphéroïdes sont intégrés (nécessaire uniquement lors de la première exécution du protocole)
   1. Mélanger 1 g de bacto-agar dans 50 mL de ddH₂O.
   2. Chauffer lentement au four à micro-ondes jusqu’à ce que le bacto-agar soit dissous et qu’un gel homogène se forme. Ne laissez pas le gel bouillir.
   3. Maintenir le bacto-agar au chaud dans un bain-marie à 60 °C.
   4. Maintenir à 4 °C entre les expériences.
2. Enrobage de sphéroïdes
   1. Le jour 1, pour chaque condition, mettez en commun un minimum de 12 sphéroïdes da....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bactoagar	BD Biosciences	Réf. 214010	Utilisé pour la préparation de gel d’agarose
Formaldéhyde	Produits chimiques VWR	Référence 9713.1000	Utilisé pour la fixation cellulaire
Casette Medim Uni-safe	Medim Histotechnologie	Référence 10-0114	Utilisé pour le stockage de sphéroïdes encastrés
Glissière d’adhérence Superfrost Ultra-Plus	Menzel-Gläser	#J3800AMNZ	Lame de verre de microscope utilisée pour l’enrobage
CellTiter-Glo Essai 3D de viabilité cellulaire	Promega	#G9681	Utilisé pour le test de viabilité cellulaire