Fabrication de bioéchafaudages par électropulvérisation : une technique pour générer des échafaudages de microporteurs dérivés de la matrice extracellulaire de tissus décellularisés

Résumé

Source : Kornmuller, A. et al. Fabrication de mousses et de microtransporteurs dérivés de la matrice extracellulaire en tant que plateformes de culture et d’administration de cellules spécifiques aux tissus. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre le procédé de fabrication de microsupports dérivés de la matrice extracellulaire par électropulvérisation. Ces microtransporteurs simulent le microenvironnement spécifique au tissu natif et sont stables dans les modèles de culture cellulaire in vitro 3D à long terme.

Protocole

1. Fabrication de microsupports dérivés de l’ECM par électropulvérisation

REMARQUE : La figure 1 présente une vue d’ensemble de la configuration de l’électropulvérisation.

1. Incuber une suspension ECM cryobroyée préalablement préparée à 37 °C avec agitation continue à 100 tr/min O/N.
   note: L’ECM cryomillé est utilisé pour fabriquer les microsupports dérivés de l’ECM afin d’assurer une plus grande uniformité de la suspension et d’éviter le colmatage lors de l’électropulvérisation.
2. Chargez 3 ml de suspension ECM dans une seringue Luer-Lock de 3 ml ....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fils à pince crocodile	VWR	Référence 470149-728
Aluminium	Fisher Scientific	Tél. : 01-213-101
Tubes à centrifuger (15 ml)	Sarstedt	Référence 62.554.205
Tubes à centrifuger (50 mL)	Sarstedt	Référence 62.547.205
Dessicateur	Fisher Scientific	8624426	Pour le stockage lyophilisé de l’ECM et des bioéchafaudages
Fiole de Dewar	Fisher Scientific	Référence 10-196-6	Forme basse ; plage de volume de 250 à 500 ml
ECM (matrice extracellulaire)			Isolé à partir de tissu adipeux humain, de derme porcin ou de myocarde porcin, tel que décrit dans Flynn et al. 2010, Reing et al. 2010 et Wainwright et al. 2010 (ref # 28, 8, 32)
azote liquide			Pour l’électropulvérisation
Lyophilisateur	Labconco	7750021	Zone Libre4.5
Agitateur d’incubateur orbital	SciLogex	8,3201E+11	Température contrôlée (37 °C)
Support d’autoclave	VWR	Référence 470019-526
Pince de support d’autoclave	VWR	Référence 21573-606
Seringue Safety-Lok	Bd	309606	Seringue Luer lock de 3 mL pour la fabrication de microsupports et la distribution d’une suspension ECM
Scoopula	VWR	Référence 89259-968	Pour la collecte des microsupports
Pousse-seringue	VWR	Référence 10117-490	Contrôlé par microprocesseur
Alimentation haute tension	Recherche Gamma Haute Tension	ES30P-5W/DDPM	Capable d’une plage de tension recommandée de 15 à 25 kV
Set d’infusion ailé	Terumo	22258092	Longueur de tube de 30 cm, 25 G 3/4" recommandée ; D’autres jauges d’aiguille peuvent être utilisées et peuvent influencer le diamètre du microporteur