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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Prélèvement de la moelle épinière
- Euthanasier la souris à l’aide d’une chambre à CO2. Évitez la luxation cervicale car elle pourrait endommager les racines ganglionnaires en raison des forces de cisaillement. À partir de là, effectuez toutes les étapes dans des conditions stériles.
- Trempez l’animal avec de l’éthanol à 70 %. Cette étape est importante pour la stérilisation et pour éviter que les cheveux ne traînent à travers les organes internes.
- Laissez la souris sécher à l’éthanol. Empêcher tout contact de l’éthanol avec les organes internes en raison de la neurotoxicité.
- Après avoir séché la souris, positionnez-la à l’aide d’épingles en position couchée (face vers le bas). Placez les goupilles sur chaque membre postérieur et antérieur.
- À l’aide d’une pince, faites une incision médiane s’étendant cranio-caudale de l’arrière du cou à la colonne lombaire. Ensuite, soulevez les lambeaux dermiques bilatéralement à l’aide d’une pince et exposez le tissu sous-cutané.
- Palper le crâne de la souris jusqu’à la jonction craniocervicale. À l’aide de ciseaux perpendiculaires à l’animal, coupez les muscles cervicaux et la colonne vertébrale au niveau de la jonction craniocervicale (la 7evertèbre cervicale), à l’aide de pinces lourdes. Disséquez la colonne vertébrale par la caudale et excisez la colonne vertébrale avec des pinces lourdes jusqu’à atteindre le niveau lombaire (niveau des membres postérieurs).
- Effectuez une section caudale complète au niveau de la colonne lombaire (les 5e vertèbres lombaires) à l’aide de pinces lourdes.
- Passez la souris (face vers le haut). Il n’est pas nécessaire de couvrir l’incision puisque le DRG est extrait des niveaux vertébraux inférieurs et non du col de l’utérus.
- Coupez sur la ligne médiane du cou vers l’abdomen, rétractez la peau latéralement puis coupez pour ouvrir le péritoine.
- Retirez les organes internes à l’intérieur du péritoine (foie, rate, pancréas, estomac et intestin) en bloc. Ensuite, retirez les organes rétropéritonéaux (c’est-à-dire les reins et le pancréas). Cranien, ouvrez la paroi thoracique.
- À l’aide d’une pince et d’une lame chirurgicale, coupez les côtes, en laissant 5 mm de côtes bilatéralement loin de la colonne vertébrale. À ce stade, la colonne vertébrale est séparée du reste du corps.
- Lavez deux fois la colonne vertébrale du sang avec une solution saline fraîche tamponnée au phosphate (PBS) froide (4 °C).