Quantification à base de nanoparticules conjuguées d’anticorps à l’aide de la microscopie à fond noir : une procédure pour capturer et quantifier des exosomes spécifiques à partir de fluides corporels

Abstract

Source : Wan, M. et al. Utilisation de la diffusion améliorée par nanoplasmons et de l’imagerie au microscope à faible grossissement pour quantifier les exosomes dérivés de tumeurs. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo décrit l’utilisation de la microscopie à fond noir à faible grossissement pour quantifier des exosomes spécifiques dans des échantillons biofluidiques de petit volume. Les exosomes ainsi identifiés peuvent servir de biomarqueurs potentiels du cancer.

Protocol

1. Préparation des sondes de nanoparticules

REMARQUE : Ce test utilise des nanotiges d’or fonctionnalisées (AuNR ; 25 nm de diamètre x 71 nm de longueur) qui sont conjuguées de manière covalente avec des polymères de neutravidines (AV) et ont un pic de résonance plasmonique de surface qui produit un signal de diffusion rouge (pic de 641 nm) lors de l’éclairage DFM.

1. Laver 40 μL d’AuNR-AV (2,56 x 10¹¹ particules) trois fois avec 200 μL de PBS (pH 7,0) par centrifugation et aspiration (8 500 x g à 4 °C pendant 10 minutes), suivie d’une dernière étape de centrifugation et d’aspir....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Eppendorf Repeater stream	Fisher Scientific	Tél. : 05-401-040
Eppendorf Recherche plus	Eppendorf	3120000011	0,1 à 2,5 μL, gris foncé
Nanotiges d’or fonctionnalisées	Nanopartz	C12-25-650-TN-DIH-50-1	Polymère de neutravidine in vitro Fonctionnalisation
HulaMixer Mélangeur d’échantillons	Thermo Fisher Scientific	15920D
Agitateur Incu 10L	Benchmark scientifique	N° H1010
Microscope de recherche inversé	Nikon	Ti-DH	Avec condenseur à fond noir, DS-Ri2 et Ti-SH-U universal support et platine motorisée
Éléments NIS	Nikon		Logiciel d’imagerie microscope
Saline tamponnée au phosphate (1X)	GE Healthcare Sciences de la vie	SH30256.02	HyClone
Verre traité aux protéines A/G Lames de substrat	Arrayit Corp.	AGMSM192BC	Substrat de microréseau de qualité supérieure
Sonicateur Q500	Qsonica, LLC	Q500-110	Avec sonde standard (#4220)
Tampon de blocage Superblock	Thermo Scientific
DOUZE 20	Sigma Sciences de la Vie	Référence 9005-64-5