Modèle de cellules souches de gliome marquées à la luciférase : une méthode médiée par lentivirus pour préparer des cellules souches de gliome marquées à la luciférase pour des études thérapeutiques in vitro

Résumé

Source : Hu, Z. et al. Un flux de travail de dépistage rapide pour identifier une thérapie combinée potentielle pour le GBM à l’aide de cellules souches de gliome dérivées de patients. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo démontre l’établissement de cellules souches de gliome marquées à la luciférase via l’administration de gènes médiée par le lentivirus. La luciférase agit comme un gène rapporteur et aide à faciliter les expériences de dépistage rapide de drogues.

Protocole

1. Préparation des GSCs marquées par la luciférase

1. Commencer par la culture des GSCs et centrifuger à 70 x g pendant 3 min à température ambiante.
2. Retirez le surnageant et digérez les cellules avec de l’accutase pendant 4 min à 37 °C. Utilisez une pointe de 200 μL et une pipette à plusieurs reprises pour dissocier et remettre en suspension la pastille cellulaire.
3. Diluez les cellules à 2 x 10⁵ cellules par puits dans une plaque de culture à 12 puits et cultivez les cellules pendant la nuit.
4. Ajouter 30 μL de surnageant du virus luciférase-EGFP (titre >10 8 UT/mL) dans chaque puits de la plaque, puis centrifuger les cellules à 1 000 x g pendant 2 h à 25 °C. Cultiver les cellules pendant la nuit.
5. Rafraîchissez le milieu le lendemain et cultivez les cellules pendant encore 48 h.
6. Observez les cellules au microscope fluorescent pour confirmer l’apparence des cellules GFP positives.
7. Utilisez un trieur de cellules à flux pour trier et sélectionner les GSC avec une fluorescence GFP élevée afin de cultiver davantage les cellules.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
B-27	Gibco	Référence 17504-044	50 fois
FEM	Gibco	PHG0313	20 ng/ml
FGF	Gibco	PHG0263	20 ng/ml
Gluta Max	Gibco	35050061	100 fois
Neurobasale	Gibco	21103049	1 fois
Pénicilline-streptomycine	HyClone	SV30010	P : 10 000 unités/ml S : 10 000 ug/ml
Pyruvate de sodium	Gibco	2088876	100 millions d’euros