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Extraction de vésicules extracellulaires : une technique pour isoler des vésicules extracellulaires à partir d’échantillons de tissus entiers à l’aide de la centrifugation différentielle

30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

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Source : Hurwitz, S. N. et al. Extraction de vésicules extracellulaires à partir de tissus entiers. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo décrit la technique d’extraction des vésicules extracellulaires à partir de tissus frais ou congelés. Les vésicules extracellulaires isolées peuvent être utilisées pour une analyse plus approfondie afin de découvrir leurs rôles significatifs dans la pathogenèse de la maladie.

Protocole

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1. Dissociation tissulaire et centrifugation différentielle

  1. Préparez 10 mL de tampon de dissociation (10 mg de papaïne ; 5,5 mM de L-cystéine ; 67 μM de 2-mercaptoéthanol ; 1,1 mM d’EDTA) dans un milieu Hibernate-E pour environ 0,4 à 1,0 g de tissu.
    REMARQUE : Toutes les solutions utilisées pour l’enrichissement et la purification des VE doivent être diluées dans de l’eau filtrée ultra-pure.
  2. Ajouter des tissus entiers frais ou congelés dans un tampon de dissociation dans un tube conique de 50 mL et incuber dans un bain d’eau chaude à 37 °C pendant 20 min. Les tissus peuvent être coupés en petits fragments ....

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Filtre 0,45 μm VWRRéférence 28145-505
Tubes d’ultracentrifugation de 12 mL Beckman Coulter331372
Tubes à ultracentrifuger de 5,5 ml Beckman Coulter344057
Inhibiteur de la phosphatase HALT (solution 100x)ThermoFisher Scientific Référence 78420
Inhibiteur de la protéase HALT (solution 100x) ThermoFisher ScientificRéférence 78438
Hibernation E mediumThermoFisher Scientific A1247601
Rotor à godet oscillant MLS-50 Beckman CoulterRéférence 367280
Ultracentrifugeuse de paillasse Optima MAX-XP Beckman Coulter393315

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Mots-clés

Dissociation tissulaireisolement d EVtampon saccharoseultracentrifugationm thode de filtrationcommunication cellulairecorps apoptotiquessolution de saccharose

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