Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Résection guidée par fluorescence et implantation d’un échafaudage
REMARQUE : Stérilisez tous les outils avant d’initialiser la chirurgie.
- Placez le cadre stéréotaxique sur la platine d’un stéréomicroscope à disséquation par fluorescence.
- Anesthésie la souris sous l’isoflurane inhalé dans une chambre d’induction. Une fois anesthésiée, fixez la souris dans le cadre stéréotaxique avec une alimentation continue en anesthésie inhalée via un adaptateur de cône nasal isoflurane. Maintenez la température corporelle à l’aide d’un coussin chauffant et/ou d’une sonde.
REMARQUE : 4 à 5 % d’isoflurane convient à l’induction et 2 à 3 % conviennent à l’entretien, mais cela doit être adapté et surveillé pour chaque souris.
- Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour prévenir le dessèchement de la cornée. Stérilisez le site d’incision du cuir chevelu avec une série de trois lingettes à l’alcool et trois lingettes à la bétadine.
- Effectuez un test de réflexe de pincement des orteils sur chaque membre et confirmez la réponse négative pour assurer une anesthésie correcte. Assurez-vous d’une fréquence respiratoire stable à environ 55 à 65 respirations/min.
- À l’aide d’une pince, pincez et soulevez doucement le cuir chevelu. Faites une incision rostrale-caudale linéaire médiane avec des ciseaux chirurgicaux. Irriguez le site d’incision avec du PBS et enlevez la graisse sous-cutanée avec un applicateur à embout de coton dans un mouvement de brossage circulaire. Disposez la peau de manière à ce que la fenêtre crânienne précédemment établie soit entièrement visible.
- Percez doucement la dure-mère juste à l’intérieur jusqu’aux bords de la fenêtre crânienne à l’aide d’une aiguille 18G. Répétez l’opération jusqu’à ce que l’incision trace complètement l’intérieur de la fenêtre.
- Retirez la dure-mère en la décollant à l’aide d’une pince fine, révélant le parenchyme et la tumeur sous-jacents.
- Localisez la tumeur U87 mCh-Fl en éteignant les lumières de la pièce et en activant le mode de fluorescence du stéréomicroscope. Préparez la résection en chargeant une pointe de pipette de 1 à 200 μL dans l’extrémité du tube d’une pompe à vide.
- Allumez la pompe à vide. Réséquez la tumeur en aspirant doucement du tissu fluorescent jusqu’à ce qu’il ne reste plus de signal. Éteignez la pompe à vide et jetez la pointe de la pipette. Éteignez la fluorescence et rallumez les lumières de la pièce.
REMARQUE : Pour contrôler les saignements, irriguez avec du PBS froid et appliquez une pression constante avec un applicateur à embout cotonnier. Dans les cas plus graves, la cavité de résection peut également être temporairement remplie d’un agent hémostatique à condition qu’elle soit retirée après l’arrêt du saignement, suivie d’une autre irrigation PBS.
- Immédiatement avant l’implantation, trempez lentement un échafaudage en PLA ensemencé par MSC dans du PBS pour éliminer les milieux indésirables et les composants associés. Implantez l’échafaudage dans la cavité de résection. Au besoin, ajoutez 1 μL de fibrinogène (67 à 106 mg/mL) suivi de 1 μL de thrombine (400 à 625 U/mL) pour fixer l’échafaudage en place.
- Une fois la dure-mère retirée et le lambeau osseux de la fenêtre crânienne déjà jeté, scellez la plaie simplement en fermant la peau et en appliquant de la colle chirurgicale. Retirer l’animal de l’anesthésique inhalé et laisser récupérer sur une surface chauffée.
