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Une technologie d’hybridome pour produire des anticorps monoclonaux contre une métallopeptidase

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Source : Xia, P., et al. Production d’anticorps monoclonaux ciblant l’aminopeptidase n dans l’épithélium de la muqueuse intestinale porcine. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo présente un test permettant de produire des anticorps monoclonaux contre l’aminopeptidase porcine N (APN), une métallopeptidase liée à la membrane, à l’aide d’une technologie d’hybridome traditionnelle. Lors de l’immunisation d’une souris avec l’APN, les cellules de la rate sont récoltées et fusionnées avec des cellules de myélome immortelles pour produire des hybridomes. Les hybridomes sont ensuite sélectionnés et proliférés à l’aide du milieu HAT (hypoxanthine-aminoptérine-thymidine) pour produire des anticorps monoclonaux spécifiques à différents épitopes de la NPA.

Protocol

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Toutes les procédures de modèle animal ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Immunisation animale

  1. Injecter par voie sous-cutanée (s.c) à des souris BALB/c femelles, âgées de 6 à 8 semaines, 50 μg de protéine APN ou de solution saline tamponnée au phosphate (PBS, contrôle négatif) mélangée à des adjuvants une fois toutes les 2 semaines. Utilisez l'adjuvant de Freund complet qui contient les mycobactéries tuées par la chaleur pour l'immunisation initiale, et l'adjuvant de Freund incomplet pour les vaccinations de rappel. Mélangez d....

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Disclosures

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Adjuvant de Freund completSigma-AldrichRéf. F5881Immunisation animale
DMEMGibco11965092Culture cellulaire
DMEM-F12Gibco12634010Culture cellulaire
Kit de comptage cellulaire amélioré-8Biotechnologie BeyotimeRéf. C0042Mesure de la viabilité et de la vitalité des cellules
Sérum fœtal bovinGibcoRéférence 10091Culture cellulaire
Antibiotique sélectif de™ la génétiqueGibco11811098Antibiotique sélectif
Supplément HAT (50X)Gibco21060017Sélection de cellules
Supplément HT (100X)Gibco11067030Sélection de cellules
Adjuvant de Freund incompletSigma-AldrichF5506Immunisation animale
Lecteur de microplaquesBioTekBOÎTE 998Analyse ELISA
Polyéthylène glycol 1500Roche Diagnostics10783641001Fusion cellulaire
Microplaque à 96 puitsCorningRéférence 3599Culture cellulaire

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Hybridoma TechnologyMonoclonal AntibodiesMetallopeptidase TargetingSpleen Cell IsolationMyeloma Cell FusionHAT Medium SelectionPEG Induced FusionPeritoneal Macrophage FeederELISA Antibody AnalysisAPN Protein Coating

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