Un test pour détecter les auto-anticorps dans le sérum humain à l’aide d’une culture neuronale de l’hippocampe

Résumé

Source : Cunquero, M., et al. Cultures neuronales de l’hippocampe pour détecter et étudier de nouveaux anticorps pathogènes impliqués dans l’encéphalite auto-immune. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo présente une technique d’identification d’anticorps contre des antigènes spécifiques dans un échantillon à l’aide d’une culture neuronale de l’hippocampe de rat. En exposant des neurones en culture à des échantillons de patients contenant des auto-anticorps ciblant les récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMDAR), la présence d’auto-anticorps liés à la surface neuronale est révélée par immunomarquage.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

PARTIE 1 : Etablissement de cultures neuronales d’hippocampe de rongeurs dissociés, fœtaux

1. Étapes préparatoires

1. Revêtement en poly-L-Lysine (PLL) des surfaces de placage (3 jours avant la dissection)
   1. Préparez le tampon de borate en ajoutant 2,38 g d’acide borique et 1,27 g de borax à 500 ml d’eau distillée et en remuant pendant 15 minutes jusqu’à ce qu’ils soient dissous. Sous une hotte, stérilisez la solution tampon en f....

Résultats

Figure 1 : Protocole visuel pour les cultures primaires de neurones de l’hippocampe. (A) Organigramme montrant les trois parties du protocole de préparation de cultures de cellules dissociées de neurones de l’hippocampe à partir de rats embryonnaires à E18. Le protocole est divisé en 1. Isolement de l’hippocampe, 2. Dissociation cellulaire, et 3. Ensemencement cellulaire. (

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîte de culture cellulaire de 10 cm	Nunc	Tél. : 12-565-020
lamelles rondes de 12 mm	pêcheur	NC9708845
20x Objectif à air fluor NA 0,75 S	Nikon	CFI Super Fluor 20X
Boîte de culture cellulaire de 3,5 cm	Nunc	Tél. : 12-565-90
Boîte de culture cellulaire de 6 cm	Nunc	Tél. : 12-565-94
Supplément B27	Gibco	Référence 17504-044
Bécher 100 mL	Pirex	-
borax	Sigma-Aldrich	Réf. B9876
acide borique	Sigma-Aldrich	Réf. B0252
Pince incurvée	Le	Référence 11009-13
D-Glucose	Sigma-Aldrich	D9434
DMEM Hyperglycémie (4,5 g/L), sans L-Glutamine, sans Rouge de Phénol	Capricorne	DMEM-HXRXA
Rat Wistar femelle (18 jours de grossesse)	Janvier	-
Sérum fœtal bovin (FBS)	Biowest	S181B-500
Pince à coude fine	Le	Référence 11251-35
Pinces à courbe fine	Le	Référence 11272-30
Pince fine-droite	Le	Référence 11251-23
Cube filtrant FITC	Nikon	Série Standard
forceps	Le	Référence 11000-12
Chèvre anti-Homme AF488	Invitrogen	N° A11013
HBSS	Capricorne	HBSS-1A
HEPES	Sigma-Aldrich	N° H3375
Milieu Hibernation-E	Gibco	Référence A12476-01
Sérum de cheval (HS)	Thermopêcheur	26050088
Anticorps humain anti-NMDAR (LCR)	Échantillon de patient	-
Anticorps humain anti-NMDAR (Sérum)	Échantillon de patient	-
ImageJ/Fidji	Nih	v1.50i
Microscope à fluorescence inversée	Nikon	Eclipse TE2000-U
Saline tamponnée au phosphate	Gibco	10010023
Poly-L-lysine (PLL)	Peptide international	OKK-35056
Bac à glaçons en polystyrène	-	-
Ciseaux à ressort de précision	Le	Référence 15000-08
ProLong Gold avec DAPI (support de montage anti-évanouissement)	Sondes moléculaires	Réf. P36941
ciseaux	Le	Référence 14068-12
Pyruvate de sodium	Biowest	N° L0642-100
Stéréomicroscope	Zeiss	Stemi 2000
Ciseaux de chirurgie	Le	Référence 14081-09
Trypsine 2,5 %	Gibco	15090046
Eau, stérile, sans endotoxines	Sigma-Aldrich	W3500