Un immunodosage sur papier pour la détection de l’immunoglobuline G

Résumé

Source : Peng, Y. et al., Liaison covalente des anticorps aux disques de papier cellulosique et leurs applications dans les immunoessais colorimétriques à l’œil nu.J. Vis. Exp. (2016)

La vidéo fait la démonstration d’un immunodosage sur papier, impliquant des disques de cellulose fonctionnalisés à l’amine réticulés avec du glutaraldéhyde. L’immobilisation covalente des anticorps de capture spécifiques des IgG-Fc, suivie de l’introduction d’immunoglobulines G et d’anticorps de détection conjugués à la peroxydase de raifort, entraîne un changement de couleur confirmant la présence d’immunoglobulines G.

Protocole

1. Greffage de groupes fonctionnels amines sur des disques de papier cellulosique

1. Préparez une feuille de papier carré d’une dimension de 1 cm × 1 cm et 100 disques de papier en papier cellulosique de grade n° 1 d’un diamètre de 6,0 mm (papier filtre à débit moyen) à l’aide d’une perforatrice.
2. Pour obtenir les groupes -NH₂ sur les disques de papier, mélangez 1 ml de 3-aminopropyltriméthoxysilane (APS) et 10 ml d’acétone dans un flacon en verre de 50 ml dans la hotte. Ajoutez des disques de papier au mélange de réactifs APS fraîchement préparé et incubez pendant 5 heures en remuant orbital (200 tr/min) à température amb....

Résultats

Graphique 1.Spectres infrarouges à transformée de Fourier (FTIR) de papier carré filtre à flux moyen non traité et traité APS (A) et de papier carré filtre à flux rapide (B). Les spectres du papier carré filtre à flux moyen non traité étaient similaires à ceux du papier carré filtre à flux moyen traité APS. L’augmentation des intensités aux bandes de 902-1 170.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Papier filtre cellulosique, Grade1 (papier filtre à débit moyen)	GE Healthcare Pte Ltd Singapour	Référence 1001 110
Papier filtre cellulosique, Grade113 (papier filtre à écoulement rapide)	Sigma-Aldrich, Singapour	Référence 1113-320
3-aminopropyltriméthoxysilane	Sigma-Aldrich, Singapour	Réf. T1255	>96 %
glutaraldéhyde	Sigma-Aldrich, Singapour	Réf. G6257	Grade II, 25 % en H2O
Album de sérum bovin	Sigma-Aldrich, Singapour	A2153
Lait écrémé en poudre	Louis François		Emballé par Kitchen Capers, Singapour
Base Tris	Promega	N° H5135
Periodate de sodium	Merck	106597
Na2HPO4	Merck	106585
KH2PO4	Merck	104873
NaCl	CALBIOCHIMIE	567441
NaOH	Merck	106462
Hcl	Merck	100317
Tampon phosphate salin (PBS)	n/a	n/a	PBS, contenant 137 mmol/L de NaCl, 2,7 mmol/L de KCl, 8,0 mmol/L de Na2HPO4 et 1,5 mmol/L de KH2PO4, est préparé avec de l’eau et ajusté à un pH de 7,4 avec 0,1 mol/L de NaOH ou 0,1 mol/L de HCl
acétone	Tee Hai Chem Pte Ltd Singapour	Référence 9005-68
Mélange de TMB et de peroxyde d’hydrogène	Solution ultra TMB-ELISA en 1 étape, Thermo Scientific Pierce	Référence 34029	1 L
Anticorps de revêtement IgG-Fc de chèvre purifié Affinity	Laboratoires Bethyl, Inc	A90-131A
Sérum de référence souris	Laboratoires Bethyl, Inc	Réf. RS10-101-5	9,5 mg/mL
Anticorps de détection IgG-Fc conjugué de chèvre HRP	Laboratoires Bethyl, Inc	A90-131P
équipement
Spectrophotomètre infrarouge à transformée de Fourier	Shimadzu IR Prestige-21	n/a
four	NUVE FN500	n/a
Mélangeur turbo VM-2000	MYC LTD	n/a
Image J	RGB, téléchargement gratuit	n/a

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