Détection d’anticorps antiglycanes circulants à l’aide d’une matrice de glycanes imprimée

Résumé

Source : Olivera-Ardid, S. et al., Printed Glycan Array : A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Anti-carbohydrate Anticorps in Small Animals.J. Vis. Exp.(2019)

Cette vidéo présente la technologie de matrice de glycanes imprimée pour l’analyse des anticorps antiglycanes circulants dans le sérum de souris. Les anticorps contenus dans le sérum interagissent avec des glycanes spécifiques sur la puce, ce qui est confirmé par immunomarquage suivi d’un balayage par fluorescence.

Protocole

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

1. Production de glycopuces

1. Préparation des microréseaux
   1. Imprimez les glycanes (50 mM) et les polysaccharides (10 μg/mL) dans une solution saline tamponnée au phosphate de 300 mM (PBS, pH 8,5) à 6 répétitions sur des lames de verre dérivées de N-hydroxysuccinimide, à l’aide d’un réseau robotique sans contact (volume de goutte ~900 pL). Chaque diapositive contient 4 blocs différents de sous-réseaux (Figure 1A, en couleurs) répétés 6 foi....

Résultats

Figure 1 : Représentation schématique (non à l’échelle) de la configuration, de l’impression et de l’analyse du réseau de glycanes.(A) Les micropuces imprimées sont développées avec une bibliothèque de 419 structures de glycanes différentes, suivies d’une détection avec un anticorps secondaire approprié marqué par fluorescence. Chaque diapositive contient 4 blocs différents de.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
anticorps
Igs anti-humaines de chèvre biotinylée	Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, États-Unis	Réf. # : 31782
Chèvre biotinylée anti-souris IgM + IgG	Thermo Fisher Scientific	Réf. # : 31807
équipement
Robot Arrayer sciFLEXARRAYER S5	Scienion AG, Berlin, Allemagne	http://www.scienion.com/products/sciflexarrayer/
Plateau de teinture (chambre d’incubation de lames)	Simport, Beloeil, QC, Canada	Réf. # : M920-2
centrifugeuse	Eppendorf, Hambourg, Allemagne	Réf. # : 5810 R
Pipettes	Gilson, Middleton, WI, États-Unis	http://www.gilson.com/en/Pipette/
Scanner de diapositives	PerkinElmer, Waltham, MA, États-Unis	ScanArray GX Plus
Incubateur à secousses	Cole-Parmer, Staffordshire, Royaume-Uni	Réf. # : SI50
Échantillons biologiques
Sérums de souris BALB/c	Ce document	N/ A
Préparation complexe d’immunoglobulines (CIP)	Immuno-Gem, Moscou, Russie	http://www.biomedservice.ru/price/goods/1/17531
Produits chimiques, réactifs et glycanes
Bibliothèque de glycanes	Institut de chimie bioorganique (IBCh), Moscou, Russie	N/ A
Albumine sérique bovine (BSA)	Sigma-Aldrich, Saint-Louis, Missouri,	Réf. # : A9418
éthanolamine	Sigma-Aldrich	Réf. # : 411000
Préadolescent-20	Merck Chemicals & Life Science S.A., Madrid, Espagne	Réf. # : 655204
Solution saline tamponnée au phospahte (PBS)	VWR International Eurolab S.L, Barcelone, Espagne	Réf. # : E404
Azoture de sodium	Sigma-Aldrich	Réf. # : S2002
Conjugué de streptavidine Alexa Fluor 555	Thermo Fisher Scientific	Réf. # : S21381
Conjugué de la streptavidine Cy5	GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, Royaume-Uni	Réf. # : PA45001
matériaux
Lames de verre dérivées du N-hydroxysuccinimide H	Schott-Nexterion, Iéna, Allemagne	Réf. # : 1070936
Papier filtre Whatman	Sigma-Aldrich	Réf. # : WHA10347509
Tubes de 1,5 mL	Eppendorf	Réf. # : 0030120086
Logiciels et algorithmes
Système d’analyse de microréseaux ScanArray Express	PerkinElmer	http://www.per kinelmer.com/microarray