Utilisation d’un ELISA sandwich pour déterminer la teneur en glycoprotéines immunogènes d’un vaccin

Résumé

Source : Jallet, C. et al., Test ELISA in vitro pour évaluer la puissance du vaccin contre la rage.J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo présente un test immuno-enzymatique indirect ou un test d’immunocapture sandwich ELISA conçu pour évaluer les niveaux de glycoprotéines immunogènes dans les vaccins. La plaque de test, contenant des anticorps spécifiques aux glycoprotéines, est incubée avec des échantillons de vaccin dilués en série, y compris des vaccins de référence et d’essai, suivie d’un immunodosage pour quantifier la teneur en glycoprotéines du vaccin testé.

Protocole

1. Précautions de sécurité

REMARQUE : Cette méthode s’applique à la fois au virus vivant de la rage (RABV) et au vaccin inactivé.

1. Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire et les procédures de sécurité.
2. Portez un équipement de protection individuelle (EPI) adéquat, y compris un manteau jetable, des gants, des masques, des lunettes, etc.
3. Lorsque le virus vivant est titré, utilisez une enceinte de sécurité biologique de classe II.
   1. Considérer toute matière en contact avec les échantillons (réactifs, solutions de lavage, etc.) comme matière infectieuse.
   2. ....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Enceinte de sécurité biologique de classe II	ThermoFisher Scientific	10445753	En cas de titrage d’un virus vivant
Plaques immuno-non stériles transparentes à fond plat à 96 puits, 400 μL, MAXISORP	ThermoFisher Scientific	439454	Bon pour la liaison à l’anticorps chargé
Hotte de laboratoire en polypropylène Equip Labo	ThermoFisher Scientific	12576606	Pour la préparation de l’acide sulfurique
Plaque d’immunologie Strong Adsorption MAXISORP Fond Plat Puits F96	Dutscher	Référence 55303	Bon pour la liaison à l’anticorps chargé
Ruban d’étanchéité pour microplaques (100 feuilles)	ThermoFisher Scientific	Référence 15036
Lecteur monomode de microplaques Sunrise	TECAN
Agitateur-incubateur de microplaques	Dutscher	441504
Laveur de microplaques Wellwash	ThermoFisher Scientific	Référence 5165000
Pipette multicanaux (30-300 μL) 12 canaux	ThermoFisher Scientific	Réf. 4661180N
Pipettes monocanal (Kit 2 : Finnpipettes F2 0.2-2 μL micro, 2-20 μL, 20-200 μL et 100-1000 μL)	ThermoFisher Scientific	4700880