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Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.
1. Informations de base du groupe d’étude
REMARQUE : Le référentiel d’informations sur les allergies du State Key Laboratory of Respiratory Disease (AIR-SKLRD) est une grande banque de sérum établie au sein de l’Institut de l’hôpital respiratoire de Guangzhou (GIRH). Initié au cours de la dernière décennie, l’AIR-SKLRD a déjà commencé à collecter et à stocker des échantillons de sérum de patients atteints de maladies allergiques et leurs informations cliniques (tableau 1). L’étude actuelle a été réalisée avec des sérums de l’AIR-SKLRD.
- Recherchez dans la base de données de l'AIR-SKLRD les sérums collectés de janvier 2015 à juin 2018 et sélectionnez les patients atteints d'une maladie allergique qui se sont révélés sensibles aux allergènes courants dans la région.
- Assurez-vous que tous les patients sélectionnés présentent des maladies allergiques, telles que la rhinite allergique et/ou l’asthme, la dermatite allergique et/ou l’urticaire, et que le sérum de ces patients contient plusieurs sensibilisations d’immunoglobulines E spécifiques des allergènes sériques (sIgE) des allergènes courants dans cette région, détectées par le système 1.
- Exclure les patients dont le dossier médical est incomplet, ceux qui n’ont pas fait l’objet d’un suivi, ceux qui refusent de donner un consentement éclairé concernant l’utilisation de leurs échantillons de sérum à des fins scientifiques, ceux qui présentent une immunodéficience identifiée, ceux qui suivent actuellement une immunothérapie ou des agents immunomodulateurs, ou ceux qui ont des infections parasitaires.
- S’assurer qu’aucun traitement ou prescription de médicament n’a été administré avant le prélèvement du sérum afin de minimiser l’interférence avec les résultats de laboratoire. Tous les échantillons de sérum qui ne répondaient pas aux critères ont été rejetés.
2. Flux d’étude et mesures d’intérêt
REMARQUE : Le système microfluidique a besoin de 100 μL de sérum pour déterminer 19 allergènes. Du sang veineux (5 ml) a été prélevé chez chaque patient à l’aide d’un vaisseau sanguin sous vide contenant un gel de séparation. Après une centrifugation de 10 minutes à 1 000 x g, la couche supérieure a été collectée pour être testée. Le sérum non utilisé a été conservé à -80 °C. Avant le test, le sérum a été conservé à température ambiante pendant 30 minutes et secoué avec un mélangeur vortex. Les cycles répétés de gel et de dégel ont été évités.
- Testez principalement les échantillons de sérum pour détecter la présence d’IgE à des allergènes entiers de Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), squames de chat (e1), squames de chien (e5), herbe des Bermudes (g2), fléole des prés (g6), blattes (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans(M5), herbe à poux (W1), blanc d’œuf (F1), lait (F2), blé (F4), arachide (F13), soja (F14), amande (F20), crabe (F23) et crevettes (F24). Suivez les instructions données dans la section 3.
REMARQUE : La détermination des sIgE a été effectuée à l’aide du kit de dosage des IgE spécifiques aux allergènes (voir le tableau des matériaux) et mesurée par un analyseur de chimiluminescence.
- Sélectionner au hasard trois échantillons parmi les échantillons contenant suffisamment de sérum (au moins 900 μL) pour une étude de reproductibilité. En gardant toutes les conditions inchangées, mesurer les trois sérums pour les sIgE allergènes quotidiennement pendant 9 jours consécutifs (c’est-à-dire 100 x 9 = 900 μL de sérum).
3. Procédure d’essai semi-automatique du système microfluidique
REMARQUE : Le système 2 intègre la technologie microfluidique automatique, les microréseaux de protéines, l’analyse à lumière froide, l’analyse IgE parallèle et la technologie de traitement d’image. Le protocole d’essai est divisé en quatre parties : préparation de l’équipement, chargement de l’échantillon, incubation et mesure.
- Préparation de l’équipement
- Allumez le PC et l’analyseur power.
note: L’interrupteur d’alimentation se trouve à gauche de la base.
- Démarrez le programme LabIT sur le PC. Si la fenêtre d’avertissement Dark Frame s’affiche, cliquez sur OK pour exécuter le test d’étanchéité. Ensuite, cliquez sur le logo central pour accéder à l’interface de fonctionnement.
note: Le système rappellera à l’utilisateur d’exécuter le test LEAK s’il est inactif pendant plus de 24 heures.
- Vérifiez la température de réaction et la température du CCD (dispositif à couplage de charge) dans le coin inférieur droit de l’écran. La température de réaction doit monter à 37 °C ± 1 °C en 10 minutes environ, et la température CCD doit descendre à -15 °C ± 1 °C.
- Exécutez le test d’étanchéité après que la température du CCD est descendue à -15 °C ± 1 °C. Avant d’exécuter le test d’étanchéité, assurez-vous qu’aucun autre objet n’est laissé à l’intérieur de l’instrument et fermez la porte. Cliquez sur Outils | Test du système | Test d’étanchéité. N’ouvrez pas la porte pendant le test. Une fois le test terminé, la fenêtre de rapport s’affiche.
- Chargement de l’échantillon
- Ajoutez 620 μL de tampon de lavage, 120 μL de tampon de blocage, 60 μL de conjugués A et B, 60 μL de substrats A et B et 100 μL d’échantillons de sérum dans le réservoir de réactif correspondant sur la cartouche microfluidique.
- Incubation
- Cliquez sur ID de la cartouche, utilisez le lecteur de codes-barres pour scanner le numéro de série de la cartouche, entrez l’ID de l’échantillon, insérez la cartouche dans l’analyseur, fermez la porte, puis cliquez sur Analyseur et exécuter pour démarrer l’analyse.
- mesure
- Exportez les résultats vers un logiciel statistique (par exemple, Excel) après la mesure.
REMARQUE : Après 30 min d’incubation, l’analyseur effectue automatiquement la mesure et rapporte le résultat.
Tableau 1 : Caractéristiques démographiques des patients. Au total, 293 sujets répondant aux critères d’inclusion ont été retrouvés, avec un âge médian de 23 ans (écart interquartile de 8 à 36 ans). Parmi eux, 170 (58,02 %) étaient des hommes et 123 (41,98 %) étaient des femmes. En outre, 92 (31,40 %) d’entre eux souffraient de rhinite allergique, 117 (39,93 %) d’asthme allergique, 36 (12,29 %) de rhinite et d’asthme et 48 (16,38 %) d’autres maladies allergiques, telles qu’une allergie alimentaire ou des allergies cutanées.
| caractéristique | Non.( % |
| Sexe, n( %) | |
| femelle | 123(41,98 %) |
| mâle | 170(58,02 %) |
| Âge, année, n( %) | |
| Médiane (25 %,75 %) | 23(8,36) |
| ≤10 | 97(33,11 %) |
| 11 à 20 | 37(12,63 %) |
| 21 à 40 | 101(34,47 %) |
| >41 | 58(19,80 %) |
| Diagnostic, n( %) | |
| Rhinite allergique | 92(31,40 %) |
| Asthme allergique | 117(39,93 %) |
| Rhinite allergique avec asthme | 36(12,29 %) |
| autrui | 48(16,38 %) |