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Procédé d’immunomarquage multiplex utilisant des anticorps primaires de la même espèce hôte

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Source : Lyu, Q., et al. Micro-ondes et fluorophore-tyramide pour l’immunomarquage multiplex sur les glandes surrénales de souris − Utilisation d’anticorps primaires non conjugués de la même espèce hôte. J. Vis. Exp. (2020).

Cette vidéo présente un test permettant d’effectuer une immunocoloration multiplex à l’aide d’anticorps primaires de la même espèce hôte. Dans cette méthode, une section de tissu surrénalien subit un processus d’immunocoloration en deux étapes. Initialement, la section est colorée avec des anticorps spécifiques des marqueurs du cortex, suivie d’un démantèlement de l’anticorps lié et d’une recoloration avec des anticorps spécifiques des marqueurs de la moelle.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toutes les procédures impliquant le prélèvement d'échantillons ont été effectuées conformément aux directives de l'IRB de l'institut.

1. Coloration avec le premier anticorps

  1. Déparaffinez et réhydratez des lames fixées au formol et incluses dans de la paraffine (FFPE) avec 5 minutes allouées à chacune des étapes suivantes : xylène ou réactifs équivalents 3x, 100 % éthanol 2x, 95 % éthanol 1x, 70 % éthanol 1x, 50 % éthanol 1x et eau distillée 2x.
    note: Les lames doivent rester humides à partir de cette étape de réhydratation jusqu’au montage à l’étape finale.
  2. Pour le prélèvement f....

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Disclosures

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Support de montage anti-effusionLaboratoires VecteursH-1000
Âne biotinylé anti-sourisJacksonImmunoTél. : 715-066-151Dilution de 1:500
Âne biotinylé anti-lapinJacksonImmunoTél. : 711-066-152Dilution de 1:500
DAPIBioLégende4228012 μg/mL dans de l’eau distillée
Microscope à fluorescenceéchoRévolution 4
Raifort : streptavidine conjuguée à la peroxydaseJacksonImmunoRéférence : 016-030-084Dilution 1:1000
Four à micro-ondes, 700WGeneral ElectricJEM3072DH1BB
Anti-CYP2F2 de sourisSanta CruzSC-374540Dilution de 1:250
Anti-TH sourisSanta CruzSC-25269Dilution 1:1000
Sérum d’âne normalJacksonImmunoRéférence 017-000-1212 % de sérum dans le PBST
Lapin anti-20αHSDKerafast,EB4002Dilution de 1:500
Lapin anti-3βHSDtransgéniqueKO607Dilution de 1:250
Lapin anti-THNovusRéf. NB300-109Dilution 1:1000
Anti-β-caténine lapinAbcam,AB32572Dilution de 1:500
Streptavidine Raifort peroxydase (SA-HRP)JacksonImmunoTél. : 016-303-084Dilution 1:1000
TSA Cy3 TyramidePerkinElmerSAT704B001EADilution de 1:100
TSA Fluorescéine TyramidePerkinElmerSAT701001EADilution de 1:100

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Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

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