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ADN mitochondrial (ADNmt) des défauts sont une cause importante de maladie et peut expliquer le vieillissement et liées au vieillissement 1,2 altérations. La théorie mitochondriale du vieillissement suggère un rôle pour les mutations de l'ADNmt, ce qui peut altérer l'homéostasie bioénergétique et la fonction cellulaire, dans le processus de vieillissement 3. Une abondance de preuves ont été rassemblées à l'appui de cette théorie de 1,4, un exemple étant l'ADNmt mutator souris 5, mais le rôle précis des dégâts ADNmt dans le vieillissement n'est pas entièrement comprise 6,7.
Observer l'activité des enzymes respiratoires est une approche simple pour enquêter sur un dysfonctionnement mitochondrial. Complexe IV ou cytochrome c oxydase (COX), est essentielle pour la fonction mitochondriale. Les sous-unités catalytiques de la COX sont codées par l'ADNmt et sont essentiels pour l'assemblage du complexe (figure 1). Ainsi, la synthèse et la fonction sont largement basées sur l'ADN mitochondrial de l'intégrité 2.Bien que d'autres complexes respiratoires pourraient être étudiés, Complexes IV et II sont les mieux adaptés à l'examen histochimique 8,9. Complexe II ou succinate déshydrogénase (SDH), est entièrement codée par l'ADN nucléaire (figure 1), et son activité n'est généralement pas affecté par l'ADNmt altérée, bien qu'une augmentation pourrait indiquer la biogenèse mitochondriale 10-12. L'ADNmt déficience observée dans les maladies mitochondriales, le vieillissement et maladies liées au vieillissement amène souvent à la présence de cellules ayant une activité COX faible ou absente 2,12-14. Bien que les activités COX et SDH peuvent être étudiées individuellement, le double étiquetage séquentielle méthode de 15,16 s'est avéré être avantageux de localiser les cellules présentant un dysfonctionnement mitochondrial 12,17-21.
Beaucoup de constitutions optimale de l'essai ont été déterminés, tels que la concentration du substrat, les accepteurs d'électrons / donateurs, intermédiaire des transporteurs d'électrons, l'influence du pH, et la réaction tIME 9,22,23. 3,3 '-diaminobenzidine (DAB) est un donneur d'électrons efficace et fiable 22. Dans les cellules avec des inhibiteurs de la COX fonctionnement, la brune indamine polymère produit localiser dans crêtes mitochondriales et saturer les cellules 22. Ces cellules avec des inhibiteurs de la COX dysfonctionnel ne seront donc pas être saturé par le produit DAB, permettant la visualisation de l'activité SDH par réduction de nitrobleu de tétrazolium (NBT), un accepteur d'électrons, d'un produit formazan extrémité bleue 9,24. Cytochrome c et substrats de succinate de sodium sont ajoutés à normaliser les niveaux endogènes entre le contrôle et malades / mutant tissus 9. La catalase est ajoutée à titre de précaution pour éviter de possibles réactions du contaminant 9,22 activité peroxydase. Méthosulfate de phénazine (PMS), un transporteur d'électrons intermédiaire, est utilisé en conjonction avec l'azoture de sodium, un inhibiteur de la chaîne respiratoire, d'augmenter la formation des produits de réaction final 9,25. En dépit de cette informationtion, certains détails critiques qui affectent le résultat de ce dosage convenable simple, en plus des contrôles de spécificité et les progrès de la technique, n'ont pas encore été présenté.