Protocoles pour l'inoculation vaginale et prélèvement d'échantillons dans le modèle expérimental chez la souris des Candida Vaginite

Résumé

Techniques clés à utiliser dans l'évaluation des Candida dans un modèle animal expérimental sont décrits. Les méthodes permettant la collecte rapide des échantillons vaginaux et des lymphocytes de ganglions lymphatiques lombaires. Ces techniques pourraient donner lieu à des souris modèles de d'autres maladies dans le tractus génital féminin inférieur.

Résumé

Vulvo-vaginale candidose (VVC), causée par les espèces de Candida, est une infection fongique des voies génitales inférieures femelles qui affecte environ 75% des femmes en bonne santé pendant leurs années reproductives ^18,32-34. Les facteurs prédisposants comprennent l'utilisation des antibiotiques, le diabète non contrôlé et la perturbation des niveaux d'hormones de reproduction en raison de la grossesse, contraceptifs oraux ou traitements hormonaux substitutifs ^33,34. VVC récurrente (RVVC), définie comme trois épisodes ou plus par an, affecte un 5 séparée à 8% des femmes sans facteurs prédisposants ^33.

Un modèle expérimental chez la souris de VVC a été établi et utilisé pour étudier la pathogenèse et la réponse de l'hôte des muqueuses à Candida ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37.} Ce modèle a également été employée pour tester le potentiel de traitements antifongiques in vivo ^13,24. Le modèle exige que les animaux soient maintenus dans un état de pseudoestrus pour optiMAL Candida colonisation / infection ^6,14,23. Dans ces conditions, les animaux inoculés aura détectable vaginale charge fongique pendant des semaines ou des mois. Des études antérieures montrent un parallèle extrêmement élevée entre le modèle animal et l'infection humaine par rapport à des propriétés immunologiques et physiologiques ^3,16,21. Les différences, cependant, incluent un manque de Candida flore vaginale normale et un pH neutre vaginale chez la souris.

Ici, nous démontrons une série de méthodes clés dans le modèle de la souris vaginite qui incluent l'inoculation vaginale, la collecte rapide des échantillons vaginaux, évaluation de la charge fongique vaginale, et des préparations de tissus cellulaires pour l'extraction / isolement. Il est suivi par des résultats représentatifs pour constituants de liquide de lavage vaginal, charge fongique, et le drainage des ganglions lymphatiques rendements des leucocytes. Avec l'utilisation d'anesthésiques, des échantillons de lavage peuvent être collectées à plusieurs moments sur les mêmes souris pour l'évaluation longitudinale deinfection / colonisation. Par ailleurs, ce modèle ne nécessite pas des agents immunosuppresseurs pour déclencher l'infection, permettant des études immunologiques dans des conditions d'accueil définie. Enfin, le modèle et chaque technique présenté ici pourrait donner lieu à l'utilisation des méthodologies d'examiner d'autres maladies infectieuses du tractus génital inférieur féminine (bactériennes, parasitaires, virales) et défenses de l'hôte respectifs locales ou systémiques.

Protocole

1. L'inoculation vaginale avec Candida albicans

1. Trois jours avant l'inoculation, tout en limitant l'animal afin d'exposer l'abdomen, injecter 100 ml d'huile de sésame contient de 0.1 à 0.5 mg de β-estradiol par voie sous cutanée dans l'abdomen inférieur. Avancer l'aiguille d'environ 5 à 10 mm latéral à la peau pour limiter les fuites au site d'injection.
   L'administration sous-cutanée d'œstrogènes dans le bas-ventre est optimale dans ce modèle en raison de la proximité de l'appareil génital. Les doses efficaces peuvent varier selon les souches de souris, les âges ou les dérivés de l'œstrogène. Dans des études précédentes utilisant l'ABC-J ....

Discussion

Un modèle expérimental chez la souris de Candida vaginite a été établi et historiquement utilisé pour les dernières décennies pour étudier la réponse d'hôte des muqueuses à Candida ainsi que pour les tests traitements antifongiques ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} Les protocoles présentés ici intègrent des méthodes efficaces et moins de main-d'œuvre, et semblent être l'un des systèmes modèle le plus optimisé de Candida vaginite décrites à ce jour. Ces techniques permette.......

Matériaux

Nom du réactif	Société	Numéro de catalogue	Commentaires
Femme souris CBA / J	Charles River Laboratories	01C38	5-6 semaines d'âge
Candida albicans (3153A)	Collection nationale des champignons pathogènes, au Royaume-Uni	NCPF3153
L'huile de sésame	Sigma-Aldrich	S3547	N'a pas besoin d'être pré-stérilisés avant leur utilisation
Β-estradiol 17-valérate	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5mg dans l'huile de sésame
Phytone peptonée	Becton Dickinson	211906	Supplément avec 0,1% de glucose
Solution de bleu trypan	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud Dextrose Agar	Becton DickInson	211584
Collagénase de type IV	Sigma-Aldrich	C5138	0,25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1,7 U / ml
L'installation de grillages	TWP	060X060S0065W36T	N ° 60 mesh, inox
Hanks solution saline équilibrée	Invitrogen	24020-117
CYTOPREP fixateur	Fisher Scientific	12-570-10	Préserve lames de frottis
Papanicolaou EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Papanicolaou OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Alun hématoxyline de Harris	EMD Chemicals	638A-85
L'isoflurane	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Utilisé avec vaporisateur isoflurane ou dans un système de goutte fermée anesthésie chambre