Le but de cet article est de décrire l'utilisation d'un modèle de glioblastome orthotopique pour les études de chimioradiothérapie. Cet article va passer si le traitement des cellules, l'implantation, et de la radiothérapie de la souris en utilisant un modèle intracrânienne.
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Article de méthode
La radiothérapie combinée à un modèle de tumeur de cerveau de souris orthotopique
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le glioblastome multiforme (GBM) sont les plus communs et agressifs adultes tumeurs cérébrales primaires 1. Ces dernières années il ya eu des progrès substantiels dans la compréhension des mécanismes de l'invasion tumorale, et l'inoculation intracérébrale directe de la tumeur fournit l'occasion d'observer le processus invasif dans un environnement physiologique appropriée 2. En ce qui concerne les tumeurs cérébrales de l'homme sont concernés, les modèles actuellement disponibles orthotopiques sont établies soit par injection stéréotaxique de suspensions cellulaires ou d'implantation d'un morceau de la tumeur par le biais d'une procédure compliquée craniotomie 3. Dans notre technique, nous prélever des cellules de culture de tissus pour créer une suspension de cellules utilisée pour implanter directement dans le cerveau. La durée de la chirurgie est d'environ 30 minutes, et que la souris doit être dans un plan constant chirurgicale, un anesthésique injectable est utilisé. La souris est placée dans un gabarit stéréotaxique par Stoetling (figure 1). À l'arrièreer la zone chirurgicale est nettoyé et préparé, une incision est faite, et la bregma est situé pour déterminer l'emplacement de la craniotomie. L'emplacement de la craniotomie est de 2 mm vers la droite et 1 mm rostrale au bregma. La profondeur est de 3 mm de la surface du crâne, et les cellules sont injectés à un débit de 2 pi toutes les 2 minutes. La peau est suturée avec 5-0 PDS, et la souris est autorisée à se réveiller sur un coussin chauffant. D'après notre expérience, en fonction de la lignée cellulaire, le traitement peut avoir lieu à partir de 7-10 jours après la chirurgie. De délivrance de médicament est dépendante de la composition de médicament. Pour des traitements de radiothérapie les souris sont anesthésiées, et mis dans un gabarit fait sur mesure. Le plomb couvre le corps de la souris et expose que le cerveau de la souris. L'étude de la tumorigenèse et l'évaluation de nouvelles thérapies pour GBM besoin précis et reproductibles modèles de tumeur de cerveau des animaux. Ainsi, nous utilisons ce modèle orthotopique du cerveau pour étudier l'interaction du microenvironnement du cerveau et de la tumeur, afin de tester l'EFFICACITÉcessus de différents agents thérapeutiques avec et sans rayonnement.
Protocole
Préparation des cellules I.
- Les cellules sont cultivées jusqu'à confluence dans du DMEM avec 10% FBS environ un 80% de confluence 225 cm 3 ballon pendant toutes les 5 souris pour être implantés.
- Aspirer les médias hors des cellules, laver avec 10 ml de PBS sans calcium ni magnésium. Aspirer PBS cellules off.
- Trypsiniser cellules avec 3 ml de trypsine, attendez 10-15 minutes, et de neutraliser la trypsine avec 15 ml de milieu.
- Pipeter toutes les cellules et les médias dans une forme conique de 50 ml. Deux grands flacons entrer dans une forme conique de 50 ml.
- Spin cellules à 1600 rpm pendant 7 min à 4 ° C. ....
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Discussion
Les gliomes malins, tels que le glioblastome multiforme, représentent les tumeurs les plus fréquentes du cerveau primaire et ont un pronostic sombre 4. La survie des patients touchés par GBM est resté pratiquement inchangé au cours de la dernière décennie (c.-à-9-12 mois après le diagnostic), malgré les progrès de la chirurgie, la radiothérapie et la chimiothérapie 5. Les caractéristiques d'un modèle approprié pour l'étude du traitement gliome devrait inclure une localisation de la tumeur r.......
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Déclarations de divulgation
Nous n'avons rien à communiquer.
Remerciements
Cette recherche est soutenue par un financement du programme intra-muros des NIH.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Lab standard stéréotaxique Instrutment | Stoelting souris et l'adaptateur Rat | ||
| Betadine | EtOH à 100% | ||
| 70% EtOH | Acétone 50% | ||
| 6 "Q-tips | Tampons imbibés d'alcool | ||
| Hamilton seringue 80008 | Ethicon 5-0 PD | ||
| 1701 SN 31-33G / 1 "/ PT3 aiguille | Des seringues de 1 ml | ||
| Aiguilles 25G | Coussin chauffant | ||
| Pommade artificielle larmes | Très belle pointe de marqueur permanent |
Références
- Bleau, A. M., Holland, E. Trapping the mouse genome to hunt human alternations. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).
- McGrady, B. J., McCormick, D. A murine model of intracranial invasion: morphological ob....
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