Murine chirurgie superficielle des ganglions lymphatiques

Summary

Pour suivre la progression d'une réponse immunitaire au fil du temps au sein de la même souris, des ganglions lymphatiques peut être enlevé par chirurgie séquentielle. Ici, nous décrivons comment cette technique peut être réalisée.

Abstract

Dans le domaine de l'immunologie, de comprendre la progression d'une réponse immunitaire contre un vaccin, une infection ou une tumeur, la réponse est souvent suivie au fil du temps. De même, l'étude de l'homéostasie lymphocytaire nécessite des expériences de cours à temps. La réalisation de ces études dans la même souris est idéale pour réduire la variabilité expérimentale ainsi que le nombre de souris utilisées. De prélèvement de sang permet des performances des expériences de cours à temps, mais il ne donne que des informations sur les lymphocytes circulants et fournit un nombre limité de cellules ^1-4. Depuis lymphocytes circulants dans le corps et résidant dans les ganglions lymphatiques ont des propriétés différentes, il est important d'examiner ces deux endroits. La suppression séquentielle des ganglions lymphatiques par la chirurgie offre une occasion unique de suivre une réponse immunitaire ou l'expansion des cellules immunitaires chez la souris même au fil du temps. En outre, cette technique donne entre 1-2x10 ⁶ cellules par des ganglions lymphatiques qui est suffisant pour perform caractérisation phénotypique et / ou des tests fonctionnels. Séquentiel chirurgie ganglionnaire ou lymphadénectomie a été utilisé avec succès par nous et les autres ^5-11. Ici, nous décrivons comment les ganglions lymphatiques brachial et inguinales peuvent être retirés en faisant une petite incision dans la peau d'une souris anesthésiée. Depuis la chirurgie est superficielle et fait rapidement, la souris récupère très rapidement, guérit bien et ne pas éprouver de la douleur excessive. Tous les deux jours, il est possible de récolter un ou deux ganglions lymphatiques permettant des expériences de cours à temps. Cette technique est donc appropriée pour étudier les caractéristiques des ganglions lymphatiques des lymphocytes résidant au fil du temps. Cette approche est adaptée aux différents modèles expérimentaux et nous pensons que de nombreux laboratoires gagneraient à effectuer séquentielles chirurgies des ganglions lymphatiques.

Protocol

1. Préparation avant la chirurgie

Les souris ont été traitées conformément au Conseil canadien sur les lignes directrices en soins des animaux.

1. Anesthésie souris par injection de kétamine / xylazine (150/300 mg / kg, ip) ou par inhalation d'isoflurane (2%, l'oxygène 1L). Si elle est disponible, l'isoflurane doit être utilisé car il permet un meilleur contrôle de la durée de l'anesthésie et la profondeur. En outre, l'oxygène est administré en même temps qui prend en charge les fonctions physiologiques de l'animal. En outre, l'isoflurane est directement éliminé par les poumons et ne nécessite donc pas d'insuffisance hépatique ou ....

Discussion

Nous avons décrit un protocole de chirurgie LN qui peut s'appliquer à de nombreux systèmes expérimentaux. Bien que très utile pour suivre les réponses immunitaires ou l'homéostasie des cellules immunitaires, cette technique a quelques limitations. Tout d'abord, seulement quatre ganglions peuvent être récoltés. Deuxièmement, la réponse immunitaire étudiée doit être systémique ou se produire dans les inguinaux superficiels ou brachiale (la peau de vidange) LNS. Enfin, le nombre de cellules récoltées est influe.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nom réactif	Entreprise	Le numéro de catalogue	Commentaires
Graefe Beaux Forceps haut de gamme de modèle	Harvard Apparatus	52-2144	Fortement courbé, 10 cm (4 po), 0,8 mm pointe
Clips Michel application et le retrait Forceps	Harvard Apparatus	52-3779	12,5 cm (5 po)
Clips Michel 100	Harvard Apparatus	52-3746	De 7,5 à 1,75 mm
Temgésic (chlorhydrate de buprénorphine)	Schering-Plough
Vetalar (chlorhydrate de kétamine)	Boniche animale Santé		DIN: 01989529
Rompun (xylazine)	Bayer		DIN: 02169592
L'isoflurane	ABBOTT		DIN: 02032384
Pommade oculaire Hypotears	Novartis ophtalmiques		DIN: 02133288
Baxedin (gluconate de Clorhexidine 2% dans l'alcool isopropylique à 70%)	Oméga	L0000017	DIN: 02251477