Ex Vivo modèle organotypique cornéenne aiguë de l'herpès simplex virus type épithéliales je infection

Résumé

Dans cet article, nous décrivons vidéo l'utilisation d'une nouvelle Ex vivo Modèle de l'herpès simplex virus de type aiguës je cornée infection épithéliale.

Résumé

Kératite herpétique est une des pathologies les plus sévères associés au virus de l'herpès simplex de type 1 (HSV-1). Kératite herpétique est actuellement la principale cause de cécité cornéenne deux dérivés et associée à l'infection dans le monde développé. Présentation typique de kératite herpétique comprend également l'infection de l'épithélium cornéen et parfois le stroma cornéen profond et l'endothélium, conduisant à de telles pathologies cornéennes permanents comme des cicatrices, l'éclaircissage et l'opacité ^1.

Cornée infection HSV-1 est traditionnellement étudiée dans deux types de modèles expérimentaux. Le modèle in vitro, dans lequel monocouches de culture de cellules épithéliales cornéennes sont infectées dans une boîte de Pétri, offre simplicité, niveau élevé de reproductibilité, des expériences rapides et des coûts relativement faibles. D'autre part, le modèle in vivo, dans lesquelles les animaux comme les lapins ou les souris sont inoculés directement dans la cornée, propose un état ​​physiologique hautement sophistiquésystème, mais coûte plus cher, plus les expériences, les soins aux animaux nécessaires, et un plus grand degré de variabilité.

Dans cet article, vidéo, nous fournissons une démonstration détaillée d'un modèle ex vivo nouvelle épithélium cornéen infection HSV-1, qui combine les forces des deux in vitro et la le des modèles in vivo. Le modèle ex vivo utilise des cornées intactes organotypically maintenues en culture et infectées par le HSV-1. L'utilisation du modèle ex vivo permet de tirer des conclusions très base physiologique, mais il est assez peu coûteux et exige un engagement de temps comparable à celle du modèle in vitro.

Protocole

Tous les réactifs et du matériel ont été achetés stérile ou ont été stérilisés avant la procédure. Cet article décrit les étapes de mise en place du modèle ex vivo en commençant par un œil énucléé avant. Dans nos expériences, nous utilisons de nouveaux globes oculaires entières de jeunes (8-12 semaines) lapins albinos (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). En outre, nous utilisons des cornées humaines obtenues à partir de la banque des yeux locale. Si vous effectuez vous-même l'énucléation, prenez soin de ne pas endommager la cornée ou du limbe lors de la procédure. Protocoles énucléation de lapin peuvent être trouvés ailleurs ^2.

Discussion

Dans cet article, vidéo, nous décrivons une méthode pour étudier aiguë épithélium cornéen infection HSV-1 dans un modèle ex vivo. Ce modèle est un tremplin utile entre le in vitro et dans des modèles in vivo de l', car elle permet de valider physiologiquement précise des résultats de culture cellulaire et, par conséquent, limite le montant de l'expérimentation animale qui doit être effectuée. En outre, le modèle ex vivo fournit une occasion unique et précieuse pour ét.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactifs / fournitures	Entreprise	Catalogue #
Minimum Essential Medium (MEM)	Mediatech	10-010-CV
Non-acides aminés essentiels (solution 100x)	Mediatech	25-025-CI
L-Glutamine	Mediatech	25 à 005-CI
Sel de sodium de pénicilline G	Sigma	P3032
Sel de sulfate de streptomycine	Sigma	S9137
Agarose	Invitrogen	15510-027
Phosphate Buffered Saline (PBS)	Préparé dans le laboratoire	N / A
Trypsine EDTA (1x)	Mediatech	25 à 053-CI
Sang DNeasy Tissue Kit &	QIAGEN	69504
RNeasy Mini Kit	QIAGEN	74104
Tampon Laemmli	Préparé dans le laboratoire	N / A
Température optimale de coupe (PTOM) composé	Tissue-Tek	4583
Yeux lapin entier (Young)	Pel-Freez	41211-2
Les cornées humaines et Yeux entiers	Banque des yeux locale	N / A
12 Plaque Bien spot Porcelaine	Alimentation de laboratoire d'Avogadro	1877
Boîte de 35 mm Tissue Culture	Faucon	353001
6 BienPlaque de culture cellulaire	Greiner Bio-One	657160
Cryomold intermédiaire	Tissue-Tek	4566