Préparation des tranches de parasagittales d'enquête sur les dorso-ventrale de l'Organisation des rongeurs cortex entorhinal médian

Résumé

Nous décrivons les procédures de préparation et d'enregistrement électrophysiologique de tranches de cerveau qui maintiennent l'axe dorso-ventral de l'médial cortex entorhinal (MEC). Parce que le codage neuronal de l'emplacement suit une organisation dorso-ventrale au sein de la MEC, ces procédures de faciliter les enquêtes des mécanismes cellulaires importants pour la navigation et de la mémoire.

Résumé

Calcul dans le cerveau repose sur les neurones en répondant correctement à leurs entrées synaptiques. Les neurones se différencient par leur complément et la distribution des canaux ioniques membranaires qui déterminent la façon dont ils réagissent aux entrées synaptiques. Cependant, la relation entre ces propriétés cellulaires et la fonction neuronale à se comporter animaux n'est pas bien comprise. Une approche de ce problème est d'étudier la topographie des circuits neuronaux organisés dans lequel la position des cartes de neurones individuels sur les informations qu'ils codent ou calculs qu'ils effectuent ^1. Des expériences utilisant cette approche suggèrent des principes pour le réglage des réponses synaptiques qui sous-tendent codage de l'information dans les circuits sensoriels et cognitifs ^2,3.

L'organisation topographique des représentations spatiales le long de l'axe dorso-ventral de l'médial cortex entorhinal (MEC) fournit une occasion d'établir des relations entre les mécanismes cellulaires et des calculs important pour la cognition spatiale. Les neurones de la couche II de la MEC rongeurs coder emplacement à l'aide en forme de grille de cuisson champs ^4-6. Pour les neurones à des positions trouvées dans la MEC dorsale de la distance entre les champs de tir individuels qui forment une grille est de l'ordre de 30 cm, tandis que pour les neurones à des positions progressivement plus ventrales cette distance augmente à plus de 1 m. Plusieurs études ont révélé des propriétés cellulaires de neurones dans la couche II de la MEC qui, comme l'espacement entre les champs de la grille de cuisson, diffèrent également en fonction de leur position de dorso-ventral, ce qui suggère que ces propriétés cellulaires sont importantes pour le calcul spatiale ^2,7-10.

Nous décrivons ici les procédures de préparation et d'enregistrement électrophysiologique de tranches de cerveau qui maintiennent la mesure dorso-ventral de l'enquête de MEC permettant de l'organisation topographique des propriétés biophysiques et anatomique des neurones de MEC. La position dorso-ventral de n identifiéeurons par rapport à des repères anatomiques est difficile d'établir avec précision les protocoles qui utilisent des tranches horizontales de MEC ^7,8,11,12, car il est difficile d'établir des points de référence pour l'exacte dorso-ventral emplacement de la tranche. Les procédures que nous décrivons permettent une mesure précise et cohérente de la localisation des cellules enregistrées le long de l'axe dorso-ventral de la MEC ainsi que la visualisation des gradients moléculaires ^2,10. Les procédures ont été élaborées pour une utilisation avec des souris adultes (> 28 jours) et ont été employées avec succès sur des souris jusqu'à 1,5 ans. Avec les ajustements qu'ils pourraient être utilisés avec de jeunes souris ou d'autres espèces de rongeurs. Un système normalisé de préparation et de mesure aidera investigation systématique des propriétés cellulaires et microcircuit de cette région.

Protocole

1. Préparation Slice parasagittale

1.1 Disséquer les hémisphères cérébraux

Tout l'expérimentation animale doit suivre local d'examen éthique et les réglementations nationales. Dans le cas des expériences décrites ici, le travail est conforme aux animaux Royaume-Uni (Scientific Procedures) Act 1986. Nous utilisons régulièrement dislocation cervicale sans anesthésie pour euthanasier la souris avant de retirer le cerveau. Alternativement, la souris peut être en phase terminale anesthésié, mais dans ce cas il peut être nécessaire pour déterminer si le choix de l'anesthésique influence des propriétés neurona....

Discussion

Pour faciliter les enquêtes sur les propriétés du circuit de MEC qui suivent une organisation dorso-ventrale, nous avons décrit ici en détail une procédure pour la production d'une préparation de tranches parasagittale qui préserve la mesure dorso-ventrale de la MEC.

Les étapes critiques

Retrait du cerveau de l'animal. Prenez un soin particulier pour éviter d'exercer des pressions sur le cerveau. Ceci est plus important que le retrait ra.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
	Coupe ACSF (mM)	Norme ACSF (mM)	Solution interne (mM)	CASNumber	Numéro de catalogue fournisseur
NaCl	86	124		7647-14-5	Sigma S9888
NaH 2 PO 4	1.2	1.2		13472-35-0	Sigma 71505
KCl	2.5	2.5	10	7447-40-7	Sigma P3911
NaHCO 3	25	25		144-55-8	Fischer S/4240
Glucose	25	20		50-99-7	Sigma G5767
Saccharose	75			57-50-1	Sigma S5016
CalifornieCl 2	0.5	2		10043-52-4	VWR 190464K
MgCl 2	7	1	2	7786-30-3	Sigma 63020
K gluconate			130	299-27-4	Sigma G4500
HEPES			10	7365-45-9	Sigma H3375
EGTA			0.1	67-42-5	Sigma E4378
Na 2 ATP			2	34369-07-8	Sigma A7699
Na 2 GTP			0.3	36051-31-7	Sigma G8877
NaPhospho-Créatine			10	19333-65-4	Sigma P7936
Biocytine (facultatif)			2.7	576-19-2	Sigma B4261

Tableau 1. Coupe ACSF, standard ACSF et K-gluconate recettes solution interne.