Transplantation orthotopique aortique chez la souris pour l'étude des maladies vasculaires

Résumé

Nous décrivons une technique dans laquelle une section de l'aorte abdominale d'une souris est transplanté orthotopique juste au-dessous des artères rénales dans un receveur allogène ou syngéniques. Cette technique peut être utile dans les études où la transplantation de grandes artères de taille uniforme est jugée avantageuse.

Résumé

Procédures vasculaires impliquant des anastomoses chez la souris sont généralement considérées comme difficiles et très dépendante de l'habileté du chirurgien. C'est en grande partie vrai, mais il ya un certain nombre de principes importants qui peuvent réduire la difficulté de ces procédures et d'améliorer la reproductibilité. Greffe aortique orthotopique est un excellent procédé pour apprendre ces principes, car elle ne concerne que deux de bout en bout anastomoses, mais nécessite une bonne technique de suture et la manutention des navires pour un succès constant. Cette procédure débute par l'acquisition d'une longueur de l'aorte abdominale à partir d'un animal donneur, suivie par la division de l'aorte native chez le receveur. L'aorte procuré est ensuite placé entre les extrémités séparées de l'aorte destinataire et suturé en place à l'aide de bout en bout anastomoses. Pour atteindre cet objectif avec succès nécessite un haut degré de concentration, de bons outils, d'une main ferme, et une appréciation de la facilité avec laquellevascularisation d'une souris peuvent être endommagés, entraînant une thrombose. L'apprentissage de ces principes importants est ce qui occupe la majeure partie du temps du débutant lors de l'apprentissage microchirurgie chez les petits rongeurs. Tout au long de ce protocole, nous nous référons à ces points importants. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les maladies vasculaires dans une variété de différents systèmes expérimentaux ^1-8. Dans le contexte présenté ici, il est le plus souvent utilisé pour l'étude de post-greffe vasculaire, une commune complication à long terme de la transplantation d'organe solide dans lequel l'hyperplasie intimale se produit au sein de l'allogreffe. Le principal avantage de ce modèle est qu'il facilite les analyses morphométriques quantitatives et le navire se trouve transplanté contiguë à la cuve endogène, qui peut servir comme un contrôle supplémentaire ^9. La technique présentée ici est le plus souvent utilisé pour les souris pesant 18-25 grammes. Nous avons accumulé plus de notre expérience dans l'utilisation de la C57BL/6J, BALB / cJ, et les souches C3H/HeJ.

Protocole

1. Préparation préopératoire

1. Les interventions chirurgicales, peu importe avec quel soin fait, entraînent un stress important. Pour minimiser les effets de ce stress et de maximiser les réserves, les animaux doivent être maintenus dans le vivarium pendant au moins 72 heures avant de l'utiliser ^10,11.
2. Instruments chirurgicaux, compresses et tampons doivent être stériles. Il n'est pas nécessaire d'utiliser des gants stériles ne fournissant que les extrémités de la suture tactile ou instruments du champ opératoire.
3. Pour l'hémostase, il est impératif que les pressions de serrage sont le minimum nécessaire. Dommage....

Résultats

La figure 1 montre un greffon aortique. Les flèches blanches indiquent les lignes de suture. Une greffe de brevet montrent une impulsion visible. La figure 2 montre une expérience typique dans laquelle la survie du receveur a été suivie pendant une période de 56 jours. Un groupe se composait de souris receveuses de type sauvage (C57BL / 6 x FVB) transplantées avec des souris BALB / c aorte. L'autre groupe, dénommé «KO» se compose de bénéficiaires (C57BL / 6 x FVB) déficientes en exp.......

Discussion

Des modèles murins de transplantation aortique fournir un certain nombre d'avantages parce que les souris sont très bien définies immunogénétiquement ^9,12,13, et ils peuvent être facilement manipulés pour modifier l'expression de gènes spécifiques, si désiré. Comme indiqué dans l'introduction, la chirurgie vasculaire chez la souris est plus difficile que la plupart des modèles en raison de la taille des navires. Même les grandes artères, comme l'aorte sont généralement pas plus de 100-200 pm d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Article	Entreprise	Catalog No.
Pinces vasculaires	Outils Fine Science	00396-01 (Taille B-1)
Pince Dumont	Outils Fine Science	11293-00
10-0 aiguilletés microsuture	AROSurgical	TK-107038
Ciseaux droits	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5620
Cauterizer basse température	Beaver-Visitec international	8441000
Enrouleur auto conservant	World Precision Instruments	14240