Différenciation isolement, caractérisation et comparative de l'homme dentaires cellules souches de pulpe Dérivé de dents permanentes à l'aide de deux méthodes différentes

Résumé

La méthode décrite isolement et la caractérisation de l'homme dentaires cellules souches de pulpe (hDPSCs) en utilisant soit enzymatique de la pulpe (DPSC-ED) Ou Conséquence directe de cellules souches à partir d'explants de tissus de pulpe (DPSC-OG). Suivie par In vitro Différenciation comparative des deux types de hDPSCs en odontoblastes.

Introduction

Les cellules souches sont des cellules clonogéniques qui possèdent deux caractéristiques remarquables, appelés multi-activité et l'auto-renouvellement ^15. Parmi toutes les cellules souches avec des puissances différentes réplicatifs, les cellules souches dentaires comme les cellules souches postnatales ont attiré l'attention ces dernières années en raison de leur accessibilité, la plasticité et haute capacité de prolifération en comparaison avec d'autres cellules souches adultes ^16. De façon caractéristique, similaire aux cellules souches mésenchymateuses, cellules souches dentaires de pâte à papier sont adhérentes des cellules clono....

Protocole

1. Préparer la solution enzymatique et moyennes prolifération (PM)

1. Assurez-collagénase de type I Solution: Peser la collagénase de type I (12 mg / ml) et dissoudre dans 1 ml de PBS et le filtre à l'aide d'un filtre de 0,2 um seringue. Puis placez-le tube de 15 ml et le garder à -20 ° C jusqu'à ce que nécessaire.
2. Assurez-dispase Solution: Peser dispase (16 mg / ml) et dissoudre dans 1 ml de PBS et le filtre à l'aide d'un filtre de 0,2 um seringue. Puis placez-le tube de 15 ml et le garder à 4 ° C jusqu'à leur utilisation.
3. Assurez solution enzymatique: Ajouter 1 ml....

Résultats

1. DPSC qui ont été obtenus par dissociation enzymatique (DPSC-ED) sont présentés ici au jour 10, 15,18 (figure 1). Les colonies engagées à se former sur près de 3 à 5 jours après l'isolement.
2. DPSC trop grands (DPSC-OG) sont présentés dans la figure 2 au jour 5, 10, 13 et 18. Fibroblast-like cellules ont commencé à migrer à partir de pulpe dans le ballon par commande parallèle de près de 5 jours après le semis.
3. DPSC au passage 3 en utilisant les deux méthodes sont présentés dan.......

Discussion

Ce protocole décrit le processus d'isolement et la caractérisation de hDPSCs de la pulpe dentaire en utilisant deux méthodes, la dissociation enzymatique et excroissance directe de cellules souches à partir d'explants de tissus de pulpe. En outre, la différenciation in vitro de ces cellules en odontoblastes, a été évaluée par dosage quantitatif Rouge d'alizarine S & QPCR.

Les protocoles existants pour isoler le tissu pulpaire de la dent humaine avait été uti.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Entreprise	Catalogue ou du terrain. nombre	Commentaires (optionnel)
α-MEM	GIBCO	11900-073
Collagénase de type I	Sigma-Aldrich	C0130-100MG
Dispase	GIBCO	17105-041
Pénicilline / streptomycine	GIBCO	15140-122
L'amphotéricine B	GIBCO	15290-018
Sérum de veau fœtal défini (FBS)	HyClone	SH30070.03
Acide L-ascorbique-2-phosphate	Sigma	A8960-5G
L-glutamine	GIBCO	25030-024
Dexaméthasone	Sigma	D4902
β-glycérol phosphate hydrate de sel disodique, BioUltra	Sigma	G9422-100G
Le phosphate de potassium monobasique	Sigma-Aldrich	P5655
Ostéogenèse Assay Kit	Millipore	PS01802031
Mouse IgG2b-PE isotype contrôle	BD Pharmingen	50808088029
FITC de souris IgG2b isotype contrôle	BD Pharmingen	559532
FITC de souris IgG1 isotype κ	BD Pharmingen	11471471
FITC / PE de souris anti-humain CD34/CD45	BD Pharmingen	341071
PE anti-human CD146	BD Pharmingen	550315
Monoclonal de souris anti-humain CD90/FITC	Daka	00034418
PE de souris anti-CD73 humain	BD Pharmingen	550257
Anti-h CD105/Endoglin PE	BD Pharmingen	FAB10971P
PE de souris anti-humain CD11b/Mac1	BD Pharmingen	5553888
CD44 PE souris anti-humain	BD Pharmingen	555479
Solution tampon phosphate (PBS)	GIBCO	003000
Tamis cellulaire de 70 pm	Faucon	352360
0,2 um seringue filtre	Millex-GV	SLGV033RB
25 flacon de culture cm 2	Sigma-Aldrich	Z707481
			ÉQUIPEMENT
BD FACSCalibur	BD	342975
Multiskan microplaques Spectrophotomètre	Thermo Scientific	51119200
Microscope Fleurcense	Olympe
Flowing 2.3.1 Version du logiciel