Article de méthode

Essai de préférence la lumière pour étudier innée et circadien Photobehavior Réglementé

DOI :

10.3791/50237

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20 avril 2013

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1Department of Biology, Institute of Cell and Developmental Biology, University of Fribourg

Dans cet article

Résumé

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Nous décrivons ici un test de préférence de lumière-obscurité pour Drosophila larve. Ce test fournit des informations sur la réglementation innée et circadien de photobehavior détection et le traitement de la lumière.

Résumé

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La lumière agit comme signal environnemental pour contrôler le comportement des animaux à différents niveaux. Le système nerveux des larves de Drosophila est utilisé comme un modèle unique pour répondre aux questions de base sur la façon dont l'information est traitée lumière et partagée entre les comportements rapides et circadien. Larves de drosophile afficher un comportement d'évitement stéréotypé lorsqu'il est exposé à la lumière. Pour étudier les comportements dépendant de la lumière des tests comparables simples de préférence lumière-obscurité peuvent être appliquées. Chez les vertébrés et les arthropodes les circuits neuronaux impliqués dans la détection et le traitement des stimuli visuels se chevauchent partiellement avec celles traitement photic informations circadien. La question fascinante de la façon dont le système de détection de la lumière et le système circadien interagissent pour maintenir sorties comportement coordonné reste largement inexploré. Drosophile est un modèle impact biologique d'aborder ces questions, en raison d'un petit nombre de neurones dans le cerveau et la disponibilité des outils génétiques pour manipul neuronaleation. Le test de préférence de lumière-obscurité présenté permet d'étudier une gamme de comportements visuels, y compris le contrôle circadien de phototaxis.

Introduction

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Nous décrivons ici une analyse comportementale basée sur la préférence pour les larves foncé (ou clair). Les larves réagissent avec une réponse forte et stéréotypé photonegative pendant les phases de recherche de nourriture (L1 à L3 tôt) 1. L'essai a pour but d'évaluer le comportement photophobes de la larve et compare la préférence claire ou foncée d'un groupe de larves se déplaçant librement dans une boîte de Petri revêtue de gélose. Cette analyse comportementale non seulement fournit des informations sur la plasticité sensibilité, l'intégration et temporelle du système visuel, il prévoit en outre des conseils sur la façon de sensibilité ....

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Protocole

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1. L'élevage larvaire

  1. Gardez voler des souches ou des croisements génétiques dans la culture de masse à 25 ° C sur un milieu de farine de maïs sous un léger 12 h cycle 12-hr sombre dans une mouche incubateur équipé de la lumière et la minuterie.
  2. Diluer bailleur de levure dans l'eau pour former une pâte liquide (10 g de levure diluée bailleur de fonds avec 3-4 ml d'eau distillée H 2 O). Ajouter une petite goutte au maïs nourriture de repas et de couvrir les flacons. Laissez sécher pendant au moins une heure pour éviter les mouches adultes coller à la pâte de levure. Mettre une petite goutte de levure diluée dans l'eau su....

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Résultats

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En suivant le protocole décrit ci-dessus, nous avons testé préférence clair-obscur en début du troisième stade larvaire de type sauvage Canton-S vole à deux fois circadiens différents CT0 et CT12. Les adultes ont été élevés à 12 h à la lumière de 12 heures sombres et laissés à pondre des œufs pendant 12 heures. Larves se développent les deux premiers jours sous le même régime de lumière-obscurité. Comme nous voulions tester modulation circadienne dans des conditions constantes (course libre de l'horloge circadienne).......

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Discussion

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Le test de préférence la lumière décrit tire parti de la photobehavior innée larvaire. Le test est facile à mettre en place, permet de nombreuses répétitions à faible coût et fournit de précieuses informations sur la détection et le traitement de lumière. Le paradigme expérimental permet la quantification relativement rapide du nombre de personnes préfèrent clair ou foncé. Cette préférence peut être affiché sous forme de pourcentages bruts ou encore comme indice de préférence (PREF). Le PREF est exprimée comme la différ.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n'ont rien à révéler.

Remerciements

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Nous remercions nos collègues du Département de biologie, Université de Fribourg pour des discussions fructueuses. Nous remercions le Bloomington Stock Center pour fournir des stocks de mouches. Ce travail a été soutenu financièrement par le Fonds national suisse (PP00P3_123339) et la Fondation Velux à SGS

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
AgarSigma-AldrichA5093-500G2,5 %; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, Suisse
Boîtes de PétriGreiner Bio-One GmbH63318090 mm de diamètre ; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Austria
LEDs LampeOSARAM80012Lampe LED blanche, 80012
Blanc Compteur d’environnementPCEPCE EM882Lux, Temp, RH %
Armoire thermostatiqueAqua Lytic (Liebherr)ET636-6
MinuterieT6185.104230V/50HZ (vérifier les spécifications pour votre pays)
Universel thermostatConradUT200
HumidificateurBoneco
Balck tapeTesa5 cm
ColleUhu
lampe incubateurPhillipsSofttone5W
Horloge minuterieZilissZiliss, Suisse
Excel SoftwareMicrosoftExcel
Origin Software 8.5OriginLab
Backer YeastMigros Suisse
Support en fer 17X28CMFisher ScientificS47808
Acide acétiqueSigma AldrichA6283-100ML20 % d’acide acétique dilluté en H2O
Lampe rougePhillipsPFE712E*8C
Spatule Fisher Scientific14-373-25A
AlimentationEAEA PS 2042-06BEn option
Feuille d’aluminiumPrix Coop
HeaterGOONNSB200C
Four à micro-ondes Intertronic
Standard semoule de maïs Nourriture
mouches Eau stabilisée
pour

Références

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  1. Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development. J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).
  2. Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C.

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Mots-clés

Photocomportement circadienTest de pr f rence lumi re obscuritAnalyse de la phototaxieCalcul de l indice de pr f renceIncubation en obscurit constanteclairage par lampe LEDStade larvaireComportement photophobe

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