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Research Article
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Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Nous décrivons la fabrication de l'appareil et le protocole de mesure des nanotubes de biocapteurs à haute fréquence à base de carbone. La technique de détection à haute fréquence atténue l'effet d'écran fondamental de l'ionique (Debye) et permet nanotube biocapteur pour être utilisé dans des solutions de force ionique élevée, où biocapteurs électroniques classiques échouent. Notre technologie offre une plate-forme unique pour le point-of-care (POC) des biocapteurs électroniques fonctionnant dans des conditions physiologiquement pertinents.
Les propriétés électroniques uniques et des ratios élevés au volume de la surface de nanotubes de carbone à paroi simple (SWNT) et de nanofils de semi-conducteurs (NW) 1-4 en font de bons candidats pour les biocapteurs haute sensibilité. Quand une molécule chargée se lie à une telle surface de détection, il modifie la densité de porteurs dans le capteur 5, ce qui entraîne des changements dans sa conductance de courant continu. Cependant, dans une solution ionique une surface chargée attire aussi les contre-ions de la solution, formant une double couche électrique (EDL). Cette EDL écrans effectivement hors la charge, et physiologiquement pertinents conditions ~ 100 mM (mM), la longueur de la projection de charge caractéristique (longueur de Debye) est inférieure à un nanomètre (nm). Ainsi, dans les solutions de force ionique élevée, détection basée sur la charge (DC) est fondamentalement entravée 6-8.
Nous surmontons les effets de dépistage de charge en détectant les dipôles moléculaires plutôt que de charges à haute fréquence, en opérant Nanot carboneube transistors à effet de champ que des mélangeurs de haute fréquence de 9 à 11. Aux fréquences élevées, la force de traction à courant alternatif ne peut plus surmonter la résistance de la solution et les ions en solution n'ont pas suffisamment de temps pour former l'EDL. En outre, la fréquence de mélange technique nous permet d'opérer à des fréquences assez élevées pour surmonter dépistage ionique, et encore détecter les signaux de détection à des fréquences inférieures 11-12. En outre, la forte transconductance de transistors SWNT offre un gain interne pour le signal de détection, ce qui évite la nécessité d'amplificateur de signal externe.
Ici, nous décrivons le protocole à (a) fabriquer des transistors SWNT, (b) fonctionnaliser biomolécules au nanotube 13, (c) la conception et le cachet d'un polydiméthylsiloxane (PDMS) de la chambre micro-fluidique 14 sur l'appareil, et (d) effectuer la détection à haute fréquence de différentes solutions de force ionique 11.
Quand une molécule chargée lie à un capteur électronique SWNT ou NW, il peut soit faire un don / accepter des électrons ou agir comme une barrière électrostatique local. Dans les deux cas, la molécule liée peut modifier la densité de charge dans le canal SWNT ou NO, ce qui conduit à une variation de la conductance de courant continu mesurée du capteur. Une grande variété de molécules 15-20 ont été détectées avec succès par l'étude des caractéristiques continues des nanocapteurs lors de tels événements contraignants. Même si mécanisme de détection basé charge détection présente de nombreux avantages, y compris la détection sans étiquette 21, sensibilité femto-molaire 22 et lisez électronique en capacité 15, il n'est efficace que dans les solutions de faible force ionique. Dans les solutions de force ionique élevée, la détection DC est entravée par le dépistage ionique 6-8. Une surface chargée attire les contre-ions dans la solution qui forme une double couche électrique (EDL) à proximité de la surface. L'EDL écrans efficacement contre ces accusations. En til force ionique de la solution augmente, l'EDL devient plus étroite et dépistage des augmentations. Cet effet de sélection se caractérise par le Debye dépistage longueur λ D,

, Où ε est la constante diélectrique du milieu, k B est la constante de Boltzmann T est la température, q est la charge de l'électron, et c est la force ionique de la solution d'électrolyte. Pour une solution typique de 100 mM de tampon, λ D est d'environ 1 nm, et le potentiel de surface sera complètement projeté à une distance de quelques nm. Comme résultat, la plupart des capteurs nanoélectroniques basé sur SWNT ou NWs fonctionnent soit à l'état sec 20 ou dans les solutions de faible force ionique 5,15,17,21-22 (c ~ 1 nM- 10 mm), sinon l'échantillon doit subir des étapes dessalage 15,23. Appareils de diagnostic au point de soins ont besoin pour fonctionner dans des forces ioniques physiologiquement pertinents sur le site de patients avec une capacité limitée de traitement des échantillons. Par conséquent, l'effet de projection ionique atténuation est cruciale pour le développement et la mise en œuvre de POC nanoélectroniques biocapteurs.
Nous réduisons l'effet de blindage ionique en actionnant capteur nanoélectronique basée sur SWNT à plage de fréquences mégahertz. Le protocole fourni ici les détails de la fabrication d'un transistor SWNT plate-forme de détection et de mesure nanoélectronique mélange à haute fréquence pour la détection biomoléculaire base. Les nanotubes de carbone à paroi simple sont cultivées par dépôt chimique en phase vapeur sur des substrats à motifs avec des catalyseurs Fe 24. Pour nos transistors SWNT, nous incorporons un haut-grille suspendue 25 placé 500 nm au-dessus du nanotube, ce qui permet d'améliorer la réponse du capteur à haute fréquence et permet également une MICR compacto-chambre fluidique pour sceller le dispositif. Les transistors SWNT sont exploités comme des mélangeurs à haute fréquence 9-11 afin de surmonter les effets fond de dépistage ioniques. Aux fréquences élevées, les ions mobiles en solution n'ont pas suffisamment de temps pour former l'EDL et les dipôles biomoléculaires fluctuation peut encore porte le SWNT pour générer un courant de mélange, qui est notre signal de détection. Le mélange fréquence se pose en raison des caractéristiques IV non linéaires d'un nanotube FET. Notre technique de détection diffère des techniques classiques de détection basée sur la charge et la spectroscopie d'impédance de 26 à 27. Tout d'abord, nous détectons dipôles biomoléculaires à haute fréquence plutôt que les frais associés. Deuxièmement, la forte transconductance du transistor SWNT offre un gain interne pour le signal de détection. Ceci évite la nécessité d'amplification externe comme dans le cas de mesures d'impédance à haute fréquence. Récemment, d'autres groupes ont également abordé la détection biomoléculaire en haute baARRIÈRE-PLAN concentrations 23,28. Cependant, ces méthodes sont plus impliqués, ce qui nécessite la fabrication complexe ou génie chimique attentive des molécules réceptrices. Notre capteur de SWNT à haute fréquence comporte une conception plus simple et utilise la fréquence propriété inhérente de mélange d'un transistor à nanotube. Nous sommes en mesure d'atténuer les effets de dépistage ioniques, ce qui promet une nouvelle plateforme de biocapteurs pour la détection de point de soins en temps réel, où biocapteurs fonctionnent directement en état physiologiquement pertinents sont souhaitées.
1. Modélisation de catalyseur pour la croissance SWNT
Astuce: stands de conception de différentes tailles, par exemple 5 microns x 5 microns, 10 microns x 5 microns etc pour tenir compte de la variabilité des dépôts SWNT phase vapeur (CVD) du processus de croissance.
2. CVD croissance de nanotubes de carbone
Astuce: Déterminez sweet spot pour la croissance de nanotubes. La croissance est uniforme sur une superficie de 2inch x 2inch aval pour notre four (figure 2c).
3. SWNT fabrication de transistors FET
Astuce: Étendre électrodes plots loin APARt sur la matrice de sorte qu'elles restent accessibles même après avoir déposé un timbre microfluidique sur la région de nanotube actif.
Astuce: Utilisez couche de chrome épais pour augmenter la force of suspendu grille supérieure. dimensions Gate sont également essentiels pour la suspension de succès.
Astuce: étalonnage de l'heure Etch est recommandé.
4. La fonctionnalisation chimique des parois latérales de nanotubes de carbone
Note: Nous Rincer la filière par l'eau de distribution DI (~ 50 ml) sur la matrice à l'aide d'une pissette. Ensuite, nous passons la filière à une autre boîte de Pétri contenant de l'eau DI et de passer de la filière autour pendant 1 min. Nous répétons les deux étapes d'un total de 8-10 fois.
5. Préparation de polydiméthylsiloxane (PDMS) Moule pour chambre de fluide
Astuce: si le mélange commence à mousser, purger la chambre et laisser reposer pendant quelquessecondes avant de dégazage à nouveau.
Embout: Le côté PDMS directement en contact avec la plaquette de silicium est extrêmement propre et plane. Ce côté sera en contact avec la matrice FET SWNT. Veillez à ne pas contaminer.
Astuce: Cela peut être fait à l'œil nu ou à l'aide d'un microscope optique avec suffisamment d'espace de travail. Si le PDMS n'adhère pas bien (généralement si la matrice et / ou le timbre en PDMS n'est pas propre), faire un plasma d'oxygène (20 watts, 15 sec) sur PDMS pour aider collage. Utiliser pouvoirs plasmatiques plus élevées que cela conduit à une liaison forte, cependant, nous avons vu déchirant d'électrodes tout en enlevant le PDMS dans un tel cas.
6. Préparation du canal d'écoulement microfluidique
Astuce: Pour éviter l'effondrement de la structure d'une largeur de canal: rapport de la hauteur de 10:1 est suffisante (300 um: 30 pm dans ce cas).
7. Configuration de mesure électrique DC
Conseil: Pour des mesures en solution, maintenir le paramètre de balayage de tension de grille au sein de | 0,7 volt | pour éviter les fuites et la réaction entre l'électrode métallique de grille et de la solution.
8. AC Configuration de mesure électrique
9. Mesures électriques en solution (No Flow)
Astuce: Utilisez la pipette pour prélever la solution précédente, puis rincer la chambre plusieurs fois avec la nouvelle solution. Mettez toujours du bas de solutions à haute concentration.
10. Mesure électrique en solution (temps d'écoulement Real)
Une image au microscope électronique à balayage de transistor SWNT avec une grille supérieure en suspension est illustré à la figure 7a. Les dimensions de porte sont essentiels pour suspension 25. Les dimensions de conception actuelles sont (longueur x largeur x épaisseur = 25 um um x 1 x 100 nm). L'électrode de grille est constituée de 50 nm nm Cr/50 Au, une couche de chrome d'épaisseur ajoute plus de force à la structure suspendue. La structure suspendue est confirmée par l'absence de courant entre le haut grille et le drain (figure 7b) fuite.
Nous utilisons le système ligand-récepteur biotine-streptavidine pour évaluer notre capteur SWNT. Pour caractériser le succès de la paroi latérale fonctionnalisation nous surveillons les courbes de transfert de DC FET dans l'air après chaque étape de fonctionnalisation. Figure 7c illustrer le fait que la courbe de transfert à commande vers la droite après biotinylation (rouge) et liaison streptavidine (bleu). Ceci peut être attribué au déclenchement électrostatique par le electronegative des groupes amine présents sur biotine PEO-amine et de la streptavidine.
Pour les mesures à haute fréquence, nous suivons le schéma le montre la figure 5b. Les caractéristiques non linéaires IV du transistor SWNT, mélange les entrées à haute fréquence à la source et la grille pour obtenir un courant de sortie de mélange, je mélange qui est notre signal de détection. Figure 7D représente Je mélange mesuré en fonction de la tension de grille pour un dispositif typique dans 100 mM de NaCl. Le courant de mélange pour un AM entrée modulé en fréquence de modulation, m ω, est donnée par 10-11

, Où m est la profondeur de modulation, V CA est l'amplitude d'entrée AM et ∂ G / ∂ V g est la transconductance du dispositif (pente de la je g à la figure 7d). Les résultats actuels de mélange (m = 0,78 et v ac = 20mV) sont en bon accord avec le modèle comme indiqué sur la figure. Pour les mesures fluidiques statiques, nous comparons la crête de ces balayages actuelles mélange de nanotubes fonctionnalisés. Pour les mesures de débit, nous fixons fréquence porteuse AM signal modulé et fixer la tension de grille (V g = 0) et surveillons je mixe pour biomoléculaire contraignant en fonction du temps, tout en maintenant un débit de fluide constant. Figure 7E-7F montre les résultats représentatifs à la fois statique et des mesures de débit, respectivement.
Pour la détection biomoléculaire, il est nécessaire que le CNT est exposé directement à la solution soit SiO 2 est complètement décapée au cours de l'étape de gravure BHF. Si cette condition n'est pas remplie, la modification chimique de la CNT de n'est pas possible car la molécule de liaison peut pas empiler le long de la paroi des nanotubes.Ceci est clairement illustré dans la figure 7g où nous ne voyons pas de changement avant et après fixation, même dans l'eau DI pour un 2 dispositif passive SiO. Cela prouve aussi que nos résultats de mesure indiquent une modification chimique de succès ainsi que la détection de biomolécules dans des concentrations ioniques élevées de fond. Dans toutes les mesures, on constate que la réponse du capteur diminue au-delà de 30 MHz, ce qui est dû à la résonance de l'installation.

Figure 1. Nanotube transistor déroulement du processus de fabrication (a) du procédé de fabrication - (1). Photomask de couche 1 (PL-1) pour le dépôt de catalyseur, (2) en métal décollage, (3) la croissance CNT, (4) PL-2 de source-drain le contact (5), le décollage de métal, (6) le dépôt de SiO 2 de blanchet (7), PL-3 pour contact de grille, (8) métalliquedécollage, (9) mince de SiO 2, le dépôt de couverture, (10) PL-4 pour le canal de gravure humide et BHF (11) Dispositif finale après le retrait de photorésist. Jeu de couleurs est illustré. (b) Schéma de la structure de l'appareil.

Figure 2. la croissance de nanotubes de carbone. (a) étape de recuit pour éliminer le résidu de résine photosensible, (b) une étape de croissance pour la croissance CNT et (c) le placement de l'appareil de four de croissance.

Figure 3. Organigramme de fonctionnalisation chimique de CNT.
Figure 5. Configuration de mesure électrique. (A) mesure en continu schématique, (b) AC mélange schématique de mesure de courant et (c) l'image de montage expérimental pour AM modulé en fréquence mélangeant mesure. Cliquez ici pour agrandir la figure .

Figure 6. dispositif de mesure de débit (a) l'image de l'ensemble de l'installation de mesure;. (b) la pompe de seringue et de la station de la sonde, et (c) l'image de dispositif avec PDMS canal d'écoulement, des tubes d'écoulement d'entrée / sortie et p électriquerobes.

Figure 7. Les résultats représentatifs pour biocapteur SWNT. (A) image MEB d'un dispositif haut de la grille suspendue typique, (b) une fuite grille-drain pour confirmer structure suspendue, (c) I dc-V courbe g de nanotubes vierge FET (noir), après biotinylation (rouge) et après la liaison streptavidine (bleu) mesurée dans l'air, (d) du courant continu, I dc (noir, V sd = 10 mV) et le mélange actuel, je mix (rouge, modulation f = 200 kHz) en fonction de V g pour le dispositif dans une solution à 100 mM de NaCl. Théorique-je mélanger obtenue en utilisant le modèle de l'équation (1) est également représentée (▲) pour la comparaison. (E), je mix-V g actuves pour biotinylé (noir) et la streptavidine-biotine liée (rouge) SWNT dans NaCl 100 mM à f = 10 MHz, (f) la mesure de débit en temps réel pour détecter streptavidine dans NaCl 100 mM et (g) le changement du signal après liaison à un entièrement passivé dispositif de commande dans l'eau DI à des fréquences différentes. Cliquez ici pour agrandir la figure .
Les auteurs déclarent qu'ils n'ont aucun intérêt financier concurrents.
Nous décrivons la fabrication de l'appareil et le protocole de mesure des nanotubes de biocapteurs à haute fréquence à base de carbone. La technique de détection à haute fréquence atténue l'effet d'écran fondamental de l'ionique (Debye) et permet nanotube biocapteur pour être utilisé dans des solutions de force ionique élevée, où biocapteurs électroniques classiques échouent. Notre technologie offre une plate-forme unique pour le point-of-care (POC) des biocapteurs électroniques fonctionnant dans des conditions physiologiquement pertinents.
Nous remercions le Professeur Paul McEuen à l'Université Cornell pour les premières discussions. Le travail est soutenu par le fonds de démarrage fournir par l'Université du Michigan et de la Fondation Programme de nanofabrication évolutive National Science (DMR-1120187). Ce travail a utilisé la nanofabrication Lurie de l'Université du Michigan, membre du Réseau National Nanotechnology Infrastructure financée par la National Science Foundation.
| REAGENTS | |||
| Les réactifs qui ont été fournis au sein de l’installation de nanofabrication de Lurie (Université du Michigan) sont marqués comme LNF dans la colonne du catalogue. Les produits chimiques qui nécessitent un équipement de protection (gants, lunettes de sécurité, masque facial, tablier) et/ou une hotte sont signalés par un EPI dans la section des commentaires. | |||
| Plaquettes de silicium (type P, < 100>, 500-550 &mu ; m d’épaisseur) | Silicon Valley Microelectronics | ||
| SPR 220 3.0 | Dow (Rohm and Haas) | Megaposit SPR | PPE |
| AZ 300MIF | AZ Electronic Material Corporation | PPE | |
| Acétone | J T Baker | 9005-05 | |
| EPI Isopropanol (IPA) | J T Baker | 9079-05 | |
| Acide fluorhydrique tamponné | Transène | PPE | |
| 1-Pyrène Acide butanoïque, ester succinimidylique | Sondes moléculaires | P130 | PPE |
| Biotine PEO Amine | Thermo Scientific | EZ-Link PEG2 Biotine, # 21346 | PPE |
| Streptavidin | Invitrogen | S 888 | |
| PPE Diméthylformamide | MP Biomedicals | 0219514791PPE | Based’élastomère |
| agent de durcissement Polydiméthylsiloxane | Dow Corning | Sylgard 184 Kit élastomère | PPE |
| SU-8 2015 | Microchem | Y111064 | PPE |
| SU-8 Développeur | Microchem | Y020100 | PPE |
| Silanisant | Sigma Aldrich | 452807 | PPE |
| Hydrogen | Purity Plus | LNF | |
| Ethylene | Purity Plus | LNF | |
| Argon | Système salin tampon phosphate | LNF | Purity Plus |
| Sigma Aldrich | PBS1 | ||
| EQUIPMENT | |||
| L’équipement fourni par Lurie Nanofabrication Facility (Université du Michigan) est désigné LNF dans la colonne Catalogue. | |||
| GCA 200 Autostepper | GCA | LNF | |
| Outil de dépôt chimique en phase vapeur basse pression | Tempress | LNF | |
| E-beam Évaporateur | Enerjet | LNF | |
| CNT four de croissance | First Nano Easy | Tube 3000 (LNF) | |
| Photomasques | Nanofilm | LNF | |
| Boîte de Petri (150mm) | LNF | ||
| Dessiccateur | Bel-Art | F420100000 | |
| Biopsie Punch | Ted Pella | 15071/78 | |
| Scalpel | Ted Pella | 548 | |
| Tube en polyéthylène PE-50 | VWR | 20903-414 | |
| Pousse-seringue | New Era Pump Systems | NE-1000 | |
| Seringue | Fisher Scientific | BD Safety-Lok Seringues | |
| Aiguilles pour seringues | Fisher Scientific | 14-821-13A | |
| Carte d’acquisition de | données National Instruments | 779111-01 | |
| Connecteur GPIB | National Instruments | 778032-51 | |
| Amplificateur à verrouillage | Stanford Research Systems | SR 830 | |
| Générateur de fréquence | HP Agilent | 8648B, 9kHz -2GHz | |
| Bias Tee | Picosecond | 5575A-104 | |
| Préamplificateur de courant | DL Instruments, LLC | DL 1211 | |
| Câbles BNC | Allied Electronics | 665-xxxx | |
| Câbles SMA | Sentro Tech Corp | SCF65141 | |