Microscopie intravitale de la microcirculation souris crémaster M. offre un service unique et bien normalisé modèle in vivo pour l'analyse de la moelle osseuse migration de cellules souches périphériques.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Microscopie intravitale de la microcirculation dans le muscle de souris Cremaster pour l'analyse des souches périphériques migration cellulaire
Dans cet article
Résumé
Résumé
À l'ère de protocoles d'application intravasculaire de cellules dans le cadre de la thérapie cellulaire régénérative, les mécanismes sous-jacents de la migration des cellules souches de tissu nonmarrow n'ont pas été complètement clarifiée. Nous décrivons ici la technique de microscopie intravitale appliquée à la cremaster microcirculation de la souris pour l'analyse de la moelle osseuse migration périphérique de cellules souches in vivo. Microscopie intravitale de l'M. crémaster a été préalablement introduit dans le domaine de la recherche inflammatoire pour l'observation directe de l'interaction des leucocytes à l'endothélium vasculaire. Depuis souches périphériques suffisante et la migration des cellules progénitrices comprend les étapes initiales similaires de rouler le long et ferme adhésion à la endothéliales tapissant il est envisageable d'appliquer le modèle de cremaster M. pour l'observation et la quantification de l'interaction des cellules intravasculary souches administrées avec l'endothélium. Comme différents composants chimiques peuvent être appliqués de manière sélective à la cible tquestion par des techniques de surfusion simples, il est possible d'établir des conditions préalables essentielles du micro-environnement, pour le recrutement de cellules souches initiale aura lieu dans un organisme vivant à l'extérieur de la moelle osseuse.
Introduction
Le but du présent article est de décrire la technique de microscopie intravitale (IVM) appliqué sur le crémaster microcirculation de la souris pour l'observation directe et l'analyse de la migration de la moelle osseuse de cellules souches périphériques.
Tissus et organes régénération, le concept actuel de cellules souches basée implique la domiciliation des cellules souches dérivées de la moelle osseuse dans le tissu lésé 1. Une étape cruciale pour la réussite de la migration de cellules souches comprend des cellules souches interaction avec l'endothélium locale au sein de l'organe lésé suivie par la migration ....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
L'ensemble du protocole après l'isolement cellulaire dure environ 2 heures.
Une. Préparation de microchirurgie
- Effectuer l'isolement de cellules souches de la moelle osseuse du donneur et un marquage fluorescent de la sous-population isolée selon des protocoles 9,12 permettre aux cellules de se reposer pendant le temps de l'opération de l'animal est effectuée normalisés. Pour le marquage fluorescent, nous recommandons CFDA (Carboxyfluorescein diacétate de succinimidylester).
- Anesthésier une souris mâle pesant 20 à 25 g avec de la kétamine (75 mg / kg) et de xylazine (2,5 mg / kg). Tout a....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
En général, l'interaction d'injecter directement des cellules souches ou progénitrices avec l'endothélium vasculaire au sein de la microcirculation du muscle crémaster est un événement rare et se produit exclusivement dans veinules post-capillaires (diamètre: 30 à 80 um). En raison de la fluorescence étiquetage laminage et les cellules souches fermement adhérentes peuvent être clairement quantifiés dans la séparation de leucocytes circulants endogènes dans les veinules observés (Figure 2). <.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
La microscopie à fluorescence intravitale permet la visualisation directe et une analyse quantitative des interactions cellules-souches endothéliales. Le modèle de muscle crémaster est particulièrement utile, étant donné que l'exposition et les techniques de microchirurgie visualisation intravitale ont été bien établies au cours de la recherche sur les interactions des leucocytes et l'endothélium différents composants chimiques peuvent être appliqués de façon sélective à du tissu cible par une technique de.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Tous les expérimentations animales, réalisées pour ce manuscrit ont été approuvés par le comité de protection des animaux et l'utilisation locale.
Les auteurs déclarent qu'ils n'ont aucun intérêt financier concurrents.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Carboxy-fluorescéine diacétate succinimidylester (CFDA) | Invitrogen, Carlsbad, CA, USA | C1157 | |
| Rhodamine 6 G (1 %) | Sigma-Aldrich, Munich, Allemagne | 83697 | |
| Kétamine (Ketanest) | Pfizer, Berlin, Allemagne | non disponible | |
| Xylacine (Rompun) | Bayer, Leverkusen, Allemagne | non disponible | |
| Phosphate de Dulbecco - solution saline tamponnée (PBS) | PAN Biotech, Aidenbach, Allemagne | P04-36500 |
Références
- Madlambayan, G. J., et al. marrow stem and progenitor cell contribution to neovasculogenesis is dependent on model system with SDF-1 as a permissive trigger. Blood. 114, 4310-4319 (2009).
- Lapidot, T., Dar, A., Kollet, O. How do stem cells find their way....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
