Une méthode sensible pour quantifier les cellules sénescentes du cancer

Résumé

Que la sénescence empêche ou favorise la tumorigenèse reste controversée. Comme les médicaments chimiothérapeutiques peuvent induire des cellules cancéreuses à vieillir, est essentiel à étudier la sénescence de proposer de nouvelles thérapies. Cependant, le test β-galactosidase standard et largement utilisé présente des inconvénients majeurs. Nous vous proposons ici un test basé sur la cytométrie flux rapide et sensible pour quantifier la sénescence.

Résumé

Les cellules humaines ne sont pas indéfiniment prolifèrent. Dès indices externes et / ou intrinsèque, les cellules peuvent mourir ou entrer un arrêt du cycle cellulaire stable appelé sénescence. Plusieurs mécanismes cellulaires tels que le raccourcissement des télomères et une expression anormale d'oncogènes mitogènes, ont été montré pour causer la sénescence. La sénescence n'est pas limitée aux cellules normales, les cellules cancéreuses ont également été signalés à vieillir.

médicaments chimiothérapeutiques ont été montré pour induire la sénescence dans les cellules cancéreuses. Cependant, il reste controversée que la sénescence empêche ou favorise la tumorigenèse. Comme il pourrait éventuellement être spécifique au patient, une méthode rapide et sensible pour évaluer la sénescence des cellules du cancer sera bientôt nécessaire.

À cette fin, le test β-galactosidase standard, la méthode actuellement utilisée, présente des inconvénients majeurs: il est temps et n'est pas sensible. Nous vous proposons ici un test basé sur la cytométrie flux d'étudier la sénescence sur live cellules. Ce test présente l'avantage d'être rapide, sensible et peut être couplé à l'immuno-marquage de différents marqueurs cellulaires.

Introduction

Depuis le début des années soixante et sa découverte par Hayflick et Moorhead, sénescence reste une curiosité cellulaire ^1. Les cellules humaines ne sont pas indéfiniment prolifèrent et, par la sénescence, Hayflick et Moorhead a inventé le processus cellulaire de vieillissement. Sénescence est un arrêt du cycle cellulaire stable dans laquelle les cellules restent métaboliquement active, par opposition à la mort cellulaire. À ce jour, quatre mécanismes cellulaires ont été montré pour induire la sénescence: le raccourcissement des télomères, des dommages de l'ADN, la chromatine perturbation, et une expression anormale d'oncogènes mitogènes ^2.

Protocole

1. Préparation de C12FDG, bafilomycine A1 et de la culture cellulaire

1. Dissoudre la poudre C ₁₂ FDG dans le diméthylsulfoxyde (DMSO) à une concentration finale de 20 mM. Aliquote et conserver à -20 ° C. DMSO doit être utilisé avec des conditions de sécurité appropriées.
2. Dissoudre la poudre bafilomycine A1 dans le DMSO à une concentration finale de 0,1 mM. Aliquote et conserver à - 20 ° C. Bafilomycine doit être utilisé avec des conditions de sécurité appropriées.
3. Cultiver RPMI ligne 8226 de la cellule, ou d'autres lignées de cellules adhérentes ou non, dans un milieu contenant 10% de sérum de veau fœtal et 1% d'antibio....

Résultats

Myélome multiple, un cancer hématologique a été utilisé pour évaluer la sénescence induite par une procédure chimiothérapeutique. Pour ce faire, une lignée de cellules de MM disponibles dans le commerce (RPMI 8226) a été traitée pendant 2 jours avec la doxorubicine, un médicament chimiothérapeutique. Les cellules ont ensuite été soumis à un traitement bafilomycine A1 et encore incubées avec C ₁₂ FDG. Les cellules ont été analysées par cytométrie de flux. Figure 1 illustre les différentes étap.......

Discussion

Nous avons présenté ici une méthode cytométrie en flux offre de quantifier la sénescence cellulaire dans les cellules cancéreuses vivantes. Cette méthode est basée sur l'utilisation du composé perméable de la membrane, la C ₁₂ FDG, et peut donc être utilisé dans tous les types de cellules et après divers traitements aussi longtemps que le composé est absorbé par les cellules. Après l'absorption cellulaire, la C ₁₂ FDG est hydrolysé par la β-galactosidase, enrichi en lysosomes des cellules s.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5-dodécanoylaminofluorescéine di-β ;-D-galactopyranoside	Invitrogen	D-2893
Diméthyl sulfoxyde	Sigma	D2650
Bafilomycine A1	Sigma	B1793
Doxorubicine	Sandoz
Trypan blue	Sigma	T8154
RPMI 1640 milieu de culture cellulaire	Lonza	BE12-702
Sérum de veau fœtal	Laboratoires PAA GmBH	A15 101
Antibiotiques	Gibco	5290-018
Cytomètre en flux Gallios	Beckman Coulter	A94291