Un désossage méthode manuelle en vigueur pour préparer Intact souris tissu nasal avec l'organisation anatomique préservée

Résumé

Le nez des mammifères est un organe multifonctionnel avec des structures internes complexes. La cavité nasale est bordée de divers épithéliums comme l'épithélium olfactif, respiratoires et squameuses qui se distinguent nettement dans des endroits anatomiques, la morphologie et les fonctions. Chez la souris adulte, le nez est couvert de différents os du crâne, ce qui limite l'accès expérimental aux structures internes, en particulier ceux dans le postérieur comme l'épithélium olfactif principal (MOE). Nous décrivons ici une méthode efficace pour obtenir la quasi-totalité et intact tissus nasaux avec l'organisation anatomique préservée. L'utilisation d'outils chirurgicaux sous un microscope à dissection, nous enlevons successivement les os du crâne autour du tissu nasal. Cette procédure peut être effectuée sur les deux, têtes de souris peau paraformaldéhyde fixes et fraîchement disséqué. La procédure de désossage complet prend environ 20-30 min, ce qui est nettement plus courte que la durée de l'essai requis pour conventionnel à base chimique decalcification. En outre, nous présentons une méthode facile pour éliminer les bulles d'air piégées entre cornets, ce qui est critique pour obtenir des coupes horizontales ou coronale ou sagittale minces intactes de la préparation de tissu nasal. Tissu nasal préparés en utilisant notre méthode peut être utilisée pour toute observation de montage de l'ensemble de l'épithélium, ainsi que morphologique, immunocytochimique, l'ARN par hybridation in situ et des études physiologiques, en particulier dans les études où spécifique à la région examen et la comparaison d'intérêt.

Introduction

La cavité nasale mammifères contient différents types de tissus et d'organes qui remplissent des fonctions distinctes. La cavité nasale constitue la partie d'entrée de l'appareil respiratoire supérieur, ce qui permet des déplacements de l'air dans et hors des poumons. L'air inhalé passe à travers la cavité nasale où il subit une température et une humidité conditionnement ^1, ainsi que de nettoyage ou de filtration pour éliminer les substances et les micro-organismes infectieux ² irritantes et toxiques. Les deux traitements sont effectués par l'épithélium nasal et les tissus sous-épithéliaux, y compris les glandes et les v....

Protocole

1. Souris Nez Préparation

Nous avons utilisé des souris C57BL / 6 de fond adultes dans cette étude. Tous les soins et les procédures animaux sont approuvés par le soin des animaux et les Comités d'utilisation (IACUC) de l'Université du Maryland, Baltimore County.

1.1 L'acquisition du nez de souris paraformaldahyde-fixes

Figure 1. Os d'un crâne de souris. A: vue dorsale du cr....

Résultats

En utilisant cette méthode, nous pouvons obtenir de manière fiable tissu nasal presque entièrement intact. Figure 2A montre une image du spécimen nasal adulte à partir d'une tête paraformaldéhyde fixe. Dans ce modèle, tous les organes sensoriels olfactifs sous-quatre, y compris le ministère de l'Environnement, organe septal, le ganglion Gruneberg et VNO, sont intacts. En outre, l'épithélium respiratoire et des tissus sous-épithéliaux, tels que les glandes et les vaisseaux, sont conservés. No.......

Discussion

Ici, nous avons démontré une procédure étape par étape pour isoler le tissu olfactif et respiratoire intact du nez de la souris en enlevant successivement les os environnants tout en épargnant les tissus ci-dessous. Nous montrons que la suppression de l'os attentif peut conserver même les tissus les plus délicats dans leur intégralité. Nous partageons également un aperçu des modifications possibles de cette technique, dans lequel on isole à la fois le cerveau et les tissus du nez ensemble pour préserver la connexion.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Dissection
Rongeur, 1.0 mm Largeur de la mâchoire	World Precision Instruments (WPI)	501333
Pince fine, Dumont 3	WPI	503235
Pince fine, Dumont 55	WPI	14099
Pince fine, Dumont AA	Fine Science Tools (FST)	11210-20
Pince à échantillons, Ciseaux d’opération dentelés	VWR	82027-440
Ciseaux	WPI	501753
Iris, Microscope de	Miltex	V95-304
	Olympus	SZ40
[en-tête]
Tissue embedding
Composé	à température de coupe optimale (OCT)Sakura Finetek	4583
Moule d’encastrement en plastique	VWR	15160-215
Pompe à vide aspirateur	Fisher Scientific	09-960-2
[en-tête]
Coloration de section
Neutral red	ACROS Organic	CAS 553-24-2	Coloration des noyaux

d’opération dissection droit