Erratum : Protocoles de préparation d'échantillons, d'imagerie et d'analyse pour la microscopie à balayage par tranchant (Knife-edge Scanning Microscopy)

Résumé

Une correction a été apportée à Préparation des échantillons, imagerie et protocoles d'analyse pour la microscopie à balayage par lame tranchante. Des modifications importantes ont été apportées au protocole de coloration de Nissl.

Résumé

Une correction a été apportée au protocole de préparation, d'imagerie et d'analyse d'échantillons pour la microscopie de balayage à arête de couteau. Des modifications importantes ont été apportées au protocole de coloration de Nissl.

Protocole

Une correction a été apportée à Préparation des échantillons, imagerie et protocoles d'analyse pour la microscopie à balayage par lame tranchante. Le protocole de coloration de Nissl a été modifié à partir de :

2. Préparation de l'échantillon : Nissl

1. La souris est profondément anesthésiée à l'aide de kétamine et de xylazine injectées par voie intrapéritonéale, puis perfusée par voie transcardiaque avec 50 mL de solution saline tamponnée au phosphate à température ambiante (pH 7,4), suivis de 250 mL de formol tamponné neutre à 10 % à température ambiante (pH 7,4), et enfin avec 3,0 cc d'encre de Chine non diluée.
2. La perfusion corporelle totale avec du sérum physiologique et du fixateur est nécessaire pour éliminer le sang du système cardiovasculaire et fixer les tissus. La perfusion avec de l'encre de Chine est nécessaire pour remplir complètement la vascularisation du système cardiovasculaire.
3. Le cerveau obtenu est ensuite déshydraté à l’aide d’une série d’alcools éthyliques à concentration croissante (25 %{}-100 %), puis inclus dans de la résine araldite en suivant le protocole décrit aux points 1.8-1.9 ci-dessus. Si le milieu d’inclusion est la résine LR blanc, le protocole décrit au point 1.10 ci-dessus est suivi.
4. La souris est profondément anesthésiée à l'aide de kétamine et de xylazine injectées par voie intrapéritonéale, puis perfusée par voie transcardiaque avec 50 mL de solution saline tamponnée au phosphate à température ambiante (pH 7,4), suivis de 250 mL de formol tamponné neutre à 10 % à température ambiante (pH 7,4), et enfin avec 3,0 cc d'encre de Chine non diluée.
5. La perfusion corporelle totale avec du sérum physiologique et du fixateur est nécessaire pour éliminer le sang du système cardiovasculaire et fixer les tissus. La perfusion avec de l'encre de Chine est nécessaire pour remplir complètement la vascularisation du système cardiovasculaire.
6. Le cerveau obtenu est ensuite déshydraté à l’aide d’une série d’alcools éthyliques à concentration croissante (25 %{}-100 %), puis inclus dans de la résine araldite en suivant le protocole décrit aux points 1.8-1.9 ci-dessus. Si le milieu d’inclusion est la résine LR blanc, le protocole décrit au point 1.10 ci-dessus est suivi.
7. La souris est profondément anesthésiée à l'aide de kétamine et de xylazine injectées par voie intrapéritonéale, puis perfusée par voie transcardiaque avec 50 mL de solution saline tamponnée au phosphate à température ambiante (pH 7,4), suivis de 250 mL de formol tamponné neutre à 10 % à température ambiante (pH 7,4), et enfin avec 3,0 cc d'encre de Chine non diluée.
8. La perfusion corporelle totale avec du sérum physiologique et du fixateur est nécessaire pour éliminer le sang du système cardiovasculaire et fixer les tissus. La perfusion avec de l'encre de Chine est nécessaire pour remplir complètement la vascularisation du système cardiovasculaire.
9. Le cerveau obtenu est ensuite déshydraté à l’aide d’une série d’alcools éthyliques à concentration croissante (25 %{}-100 %), puis inclus dans de la résine araldite en suivant le protocole décrit aux points 1.8-1.9 ci-dessus. Si le milieu d’inclusion est la résine LR blanc, le protocole décrit au point 1.10 ci-dessus est suivi.

à :

2. Préparation de l'échantillon : Nissl

1. Ce protocole suit de près le protocole de Mayerich et al.⁷
2. La souris est profondément anesthésiée à l'aide de kétamine et de xylazine injectées par voie intrapéritonéale, puis perfusée par voie transcardiaque à l’aide de 50 mL de solution saline tamponnée au phosphate à température ambiante (pH 7,4), suivis de 250 mL de paraformaldéhyde à 4 % tamponné au phosphate et refroidi (pH 7,4).
3. La souris est ensuite perfusée avec 100 mL d’une solution de colorant thionine à 0,1 % dans de l’eau déionisée, puis placée au réfrigérateur (4 °C) pendant 24 heures.
4. Après 24 heures, le cerveau est extrait du crâne et placé dans une solution fraîche de thionine à 0,1 %, puis laissé à 4 °C pendant 7 jours. La durée prolongée de cette étape vise à assurer une infiltration complète de la thionine dans le prélèvement en bloc.
5. Le cerveau est ensuite décoloré et déshydraté à l’aide d’une série progressive d’éthanol, en commençant par un mélange d’eau et d’éthanol à 50 %, puis en augmentant progressivement jusqu’à l’éthanol à 100 %, sur une période de 6 semaines. Les changements d’éthanol de 50 % à 70 % sont conservés au réfrigérateur (4 °C), tandis que tous les changements d’éthanol supérieurs à 70 % sont conservés à température ambiante.
6. Après trois changements d’acétone (2 à 4 jours dans chaque solution à température ambiante), le cerveau est ensuite inclus dans de la résine araldite en suivant le protocole décrit aux points 1.8 à 1.9 ci-dessus. Si le milieu d’inclusion est la résine LR white, le protocole décrit au point 1.10 ci-dessus est suivi.