Une simple mouche Essai de comportement alimentaire dans Drosophila

Résumé

Dans cet article, vidéo, nous décrivons un test automatisé pour mesurer l'effet de la faim ou de satiété sur le comportement dépend olfactif de recherche de nourriture dans le fruit de mouche adulte Drosophila melanogaster.

Résumé

Pour beaucoup d'animaux, la faim favorise des changements dans le système olfactif d'une manière qui facilite la recherche de sources de nourriture appropriés. Dans cet article, vidéo, nous décrivons un test automatisé pour mesurer l'effet de la faim ou de satiété sur le comportement dépend olfactif de recherche de nourriture dans le fruit de mouche adulte Drosophila melanogaster. Dans une boîte étanche à la lumière éclairé par une lumière rouge qui est invisible pour les mouches des fruits, une caméra reliée à un logiciel d'acquisition de données personnalisées surveille la position des six mouches simultanément. Chaque volée est limitée à marcher dans les arènes individuelles contenant une odeur de nourriture au centre. Les arènes de tests reposent sur ​​un sol poreux qui sert à prévenir l'accumulation d'odeurs. La latence pour localiser la source de l'odeur, une métrique qui reflète la sensibilité olfactive sous différents états physiologiques, est déterminée par analyse de logiciels. Ici, nous discutons les mécanismes essentiels de l'exécution de ce paradigme comportemental et portent sur des questions spécifiques relatives à la mouche loading, la contamination de l'odeur, de la température d'essai, la qualité des données, et l'analyse statistique.

Introduction

États de la faim promouvoir deux types de comportements d'appétit: la recherche de la nourriture et de consommation alimentaire ^1. Ce test comportemental simple est utile pour l'étude des comportements associés à la recherche de nourriture chimiotactiques ^2,3. En particulier, il permet de suivre la position de la mouche, la vitesse de marche et la latence à la localisation d'une cible de l'odeur des aliments. Latence de la recherche de nourriture sert métrique pour mesurer les changements dans la sensibilité du système de détection d'odeur de la mouche en aval de l'évolution de son état interne appétit. Une version manuel....

Protocole

Une. Fly Collection et famine

1. Arrière Les mouches expérimentales en température et d'humidité des conditions contrôlées (par exemple 21 ° C, 50-60% d'humidité relative) sur un cycle de lumière de 12 h / sombre.
2. Récupérer mouches femelles le jour de l'éclosion et les placer, avec 4-5 hommes, dans de nouveaux flacons alimentaires (maximum de 30 par flacon). Âge vole 2-5 jours.
3. Préparer les chambres pour voler la famine.
   1. Poussez un tissu unique (4,8 x 8,4 pouces) vers le bas d'un flacon en plastique vide. Complètement tremper le tissu avec de l'eau distillée. Utilisez un objet à pousser vers le bas sur....

Résultats

Le logiciel d'analyse de données et la mise en page, un exemple de ce qui peut être vu sur la figure 1, sont utilisés pour évaluer les performances de chaque volée lors de son essai de 10 min, selon un ensemble de critères d'analyse. Les critères suivants sont utilisés pour déterminer si les données de chaque volée seront utilisées pour l'analyse de données et sont conçus pour éliminer les mouches qui sont incapables d'accomplir la tâche de recherche de nourriture en raison d'une blessure, d'une maladie.......

Discussion

Dans ce protocole, nous décrivons une procédure pas-à-pas pour l'essai du comportement de recherche de nourriture. En plus des odeurs liées à l'alimentation, il peut également être adapté pour l'étude de la capacité de la mouche de la placer d'autres objets d'odeurs. Par exemple, il peut être appliqué vers l'étude du comportement de localisation de compagnon dans les mouches mâles ³ Il ya plusieurs considérations supplémentaires pour ce protocole que nous allons mentionner ici concerna.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Spectre de		vinaigre de cidre de pomme	disponible dans le commerce
Agarose, type VII	Sigma-Aldrich	A0701	agarose à basse température de gélification
Plaque			La plaque personnalisée contient 6 arènes. Chaque manège a un diamètre de 60 mm et une hauteur de 6 mm. Voir les schémas des plaques d’essai pour des mesures spécifiques.
Plate-forme LabVIEW V.8.5	National Instruments	776670-09	pour les programmes : PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi REMARQUE : « elapsed time.vi », « time into file.vi » et « two object detect.vi » sont des sous-programmes inclus qui doivent être disponibles pour que le programme d’acquisition de données principal « FlyTracking--Six zones.vi » puisse fonctionner.
LabVIEW Vision 8.5
Logiciel d’acquisition de vision LabVIEW 8.5
LabVIEW Vision Builder AI 3.5
Igor Pro V.6	Wavemetric, Inc.		plate-forme pour la macro : Analyse de données pour le suivi des mouches--Six Zones
Basler scA1390-17fm	National Instruments	779980-01	Appareil photo numérique REMARQUE : pilote pour appareil photo disponible à Baslerweb.com
objectif 8 mm	National Instruments	780024-01	Objectif pour appareil photo numérique Basler
Plaque de diffusion en verre dépoli	Edmund Optics	personnalisé	Diffuse la lumière, 25 cm x 30 cm
US Std. No. 100	Fischer Scientific	04-881X	Tamis avec ouverture nominale de 150 &mu ; m
Option d’éclairage 1
Rétroéclairage LED 660 nm (20 cm x 20 cm)	Spectra West	BL47192	une option d’éclairage plus simple mais plus coûteuse.
Alimentation pour rétroéclairage LED	Spectra West
Lighting Option 2
660 nm LEDs	Superbrightleds	Longueur d’onde 660 nm (environ 7 x 7 matrice de LED pour un panneau de 14,7 pouces x 9,75 pouces)
Alimentation linéaire DC	GW Instek	GPS-1830D	Alimentation pour panneau LED
Solderless Breadboard	Digikey	922354-ND	Planche d’essai pour LED

d’essai acrylique RL5R1330