L’échographie transabdominale est décrite comme un moyen efficace et non invasif d’évaluer le statut reproducteur chez reeves' cerf muntjac. Ces méthodes peuvent être employées pour réaliser le diagnostic tôt de grossesse et pour évaluer la viabilité foetale. Les applications futures de cette technique incluent l’estimation de l’âge gestational et des effets de la maladie maternelle sur le développement foetal.
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Article de méthode
Échographie transabdominale pour le diagnostic de grossesse chez le cerf muntjac de Reeves
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est, et sont actuellement à l’étude comme un modèle potentiel de transmission de maladies à prions et de pathogenèse. La transmission verticale est un domaine d’intérêt pour les chercheurs qui étudient les maladies infectieuses, y compris les maladies à prions, et ces recherches nécessitent des méthodes efficaces pour évaluer les effets de l’infection maternelle sur la performance reproductive. L’examen ultrasonographique est un outil bien établi pour diagnostiquer la grossesse et évaluer la santé fœtale chez de nombreuses espèces animales1-7,y compris plusieurs espèces de cervidés d’élevage8-19,mais cette technique n’a pas été décrite chez le cerf muntjac de Reeves. Ici nous décrivons l’application de l’ultrason de transabdominal pour détecter la grossesse dans le muntjac fait et pour évaluer la croissance et le développement foetaux tout au long de la période gestational. À l’aide de cette procédure, les femelles gravides ont été identifiées dès 35 jours après l’appariement bêler bêler-bouc, ce qui était un moyen efficace de surveiller la grossesse en toute sécurité à intervalles réguliers. Les objectifs futurs de ce travail comprendront l’établissement de références normales de mesure fœtale pour l’estimation de l’âge gestationnel, la détermination de la sensibilité et de la spécificité de la technique de diagnostic de la grossesse à divers stades de la gestation, et l’identification des variations dans la croissance et le développement du fœtus dans différentes conditions expérimentales.
Introduction
L’examen ultrasonographique est une méthode bien décrite de diagnostic de grossesse chez les bovins1,les moutons2,3,les chèvres4,les chevaux5,les animaux de compagnie6,7et d’autres espèces animales domestiques. Cette modalité d’imagerie a également été identifiée comme un outil précieux pour la détection de la grossesse et l’estimation de l’âge fœtal chez plusieurs espèces de cervidés captifs, y compris lesdaims 8-11,les cerfs rouges12-16,les cerfs sika d’Hokkaido17et les rennes18,19. Dans de nombreux cas, l’échographie a produit des taux de précision plus élevés que d’autres mécanismes de détection de grossesse, tels que la progestérone sérique ou l’analyse des glycoprotéines associées à la grossesse9,18. En outre, la visualisation ultrasonographic de l’appareil reproducteur peut fournir des informations additionnelles concernant la viabilité foetale, l’âge gestational, et l’identification des anomalies développementales qui seraient autrement difficiles à évaluer. L’utilité de l’échographie pour évaluer l’état reproducteur suggère que cette méthodologie devrait être adaptée à d’autres espèces chez lesquelles des programmes de reproduction actifs sont utilisés.
Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est20. Bien que le cycle de reproduction de ces animaux ne soit pas bien caractérisé dans leurs territoires d’origine, les études des populations sauvages dans certaines parties du sud de l’Angleterre ont amélioré la compréhension de leurs schémas de reproduction20. Contrairement à la plupart des cervidés, le muntjac de Reeves semble se reproduire toute l’année, sans pics de fauve saisonniers apparents20-22. Le muntjac femelle donne généralement naissance à un seul faon après une période de gestation de 210 jours, et entre de manière fiable dans un oestrus post-partum dans les 24 heures20-22. Est-ce que ne pas concevoir au cours de cette période post-partum reviendra à l’oestrus environ 24-25 jours plus tard20. Dans les situations captives, la reproduction est généralement obtenue par le logement avec un ou plusieurs mâles intacts. Ce système produit des taux de conception satisfaisants et nécessite peu de compétences techniques pour le personnel, mais les dates de reproduction exactes sont difficiles, voire impossibles, à déterminer.
Les muntjac sont couramment utilisés dans les études cytogénétiques en raison de la large gamme de nombres de chromosomes diploïdes et du taux élevé de diversification caryotypique parmi les différentes espèces23. Ces animaux font également l’objet d’une étude en tant que modèle de pathogenèse et de transmission des maladies à prions, avec un intérêt particulier accordé à l’étude de la transmission verticale de la maladie déchéante chronique (MDC) chez les cervidés. L’importance du muntjac dans un certain nombre d’applications de recherche différentes suggère que des technologies de reproduction améliorées devraient être établies pour compléter les procédures d’enquête actuelles. Plus précisément, les mécanismes non invasifs pour évaluer la période gestationnelle pourraient potentiellement élucider des variations critiques dans la performance reproductive et la croissance et le développement foetaux dans différentes conditions expérimentales. De plus, l’élaboration de références de mesure fœtale en temps réel pourrait être utile pour estimer l’âge gestationnel dans les situations où les dates de reproduction ne peuvent pas être déterminées. Des études antérieures ont décrit des mécanismes d’utilisation des mesures fœtales, telles que la longueur de la croupe couronne (LCR), la profondeur thoracique (CD) et la longueur de la tête (LH) pour estimer le stade approximatif de gestation chez les espèces de cervidés11-14, 16,17. De plus, certaines de ces études ont également établi des lignes directrices décrivant quand des jalons spécifiques du développement, tels que la minéralisation squelettique ou le rythme cardiaque fœtal, peuvent être identifiés8-19. Bien que ces données puissent être utiles pour aider à guider l’analyse échographique reproductive dans le muntjac, la plupart des autres espèces de cervidés étudiées ont une taille corporelle beaucoup plus grande et des périodes gestationnelles plus longues, réduisant ainsi la valeur translationnelle de ces études pour les applications de muntjac.
Le protocole décrit ici décrit l’échographie de transabdominal du muntjac femelle aux fins de diagnostiquer et de surveiller la grossesse. L’exécution réussie de ce protocole peut faciliter la détection et l’évaluation tôt de grossesse de la croissance et du développement foetaux. Cette technique a des applications précieuses dans la conduite d’études sur la reproduction, le développement in utero, ou la transmission verticale des maladies infectieuses dans un modèle de petit cervidés et peut également être utile à des fins cliniques dans des opérations d’élevage en captivité.
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Protocole
1. Préparation procédurale
Toutes les procédures animales décrites ont été examinées et approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université d’État du Colorado, une association pour l’évaluation et l’accréditation des soins aux animaux de laboratoire (AAALAC), institution accréditée intl.
- Avant l’examen, immobiliser les animaux à l’aide de protocoles appropriés de sédation ou d’anesthésie pour assurer la relaxation et permettre un positionnement approprié. Un maître-chien retient le cerf tandis qu’une deuxième personne administre la sédation à l’animal.
Remarque : Les auteurs ont trouvé la combinaison suivante pour fournir la sédation efficace dans cette espèce : butorphanol (0.45 mg/kg), azaperone (0.035 mg/kg), et médetomidine (0.04 mg/kg), administrés par voie intramusculaire dans les muscles fessiers. - Une fois que la blouse a atteint un plan de sédation qui permet une manipulation conforme, placez-la en occupation dorsale ou latérale sur une table d’examen ou dans une auge en V. Élever légèrement la tête, le cou et le thorax (environ 20-30°) pour réduire le risque de régurgitation et d’aspiration du contenu rumenal et pour faciliter une ventilation appropriée pendant la procédure.
Remarque : Chez la plupart des cervidés ou d’autres espèces de ruminants, l’échographie abdominale est effectuée chez les animaux debout; cependant, la petite taille et les considérations comportementales de cette espèce exigent la sédation lourde pour l’examen et le positionnement sternal est donc plus difficile et peut exclure la technique efficace de formation image. Le positionnement de l’animal à mi-chemin entre la réamence sternale et latérale peut être idéal pour réduire le risque de régurgitation et d’hypoventilation et devrait être envisagé si possible. Dans toute position couchée, il est essentiel de surveiller attentivement les respirations des animaux et d’arrêter immédiatement l’examen et de placer l’animal en récumbency sternale si une régurgitation ou une hypoventilation est notée. - Si nécessaire, coupez les poils de la région de l’abdomen à examiner afin d’obtenir un contact adéquat entre l’empreinte du transducteur et la peau.
Remarque : Au début de la gestation, des signes de grossesse peuvent être détectés dans l’abdomen caudal près des glandes mammaires. Cette région du muntjac est typiquement sans poils, et donc le rasage peut ne pas être indiqué pour le moment. Au fur et à mesure que le fœtus grandit et que l’utérus se distend pour occuper une position plus crânienne dans l’abdomen, une coupure des cheveux sera nécessaire avant l’imagerie. Il faut prendre soin d’éviter de causer des traumatismes mécaniques à la peau, y compris des lacérations causées par des lames de rasoir ou des blessures thermiques causées par des tondeuses électriques. - Placez l’unité d’échographie dans un endroit qui permet au technicien de visualiser facilement le moniteur tout en effectuant l’examen avec sa main dominante. Entrez les informations d’identification des animaux (nom, numéro d’identification, etc.)dans le système pour étiqueter automatiquement les images et les boucles vidéo enregistrées.
2. Examen échographique de reproduction transabdominal
- Appliquez une quantité généreuse de gel de couplage acoustique sur l’abdomen caudal.
- Placez un transducteur linéaire incurvé de 5 à 10 MHz sur la peau de l’abdomen caudal, immédiatement crânien au pubis, et déplacez-le lentement dans une direction crânienne pour évaluer les structures dans la cavité pelvienne. Balayez les quarts de cercle gauche et droit de l’abdomen caudal pour évaluer les deux cornes du muntjac' utérus bicorne de s.
Remarque : L’échographie abdominale complète implique l’évaluation de tous les viscères abdominaux, y compris le foie, les reins, la rate, le tractus gastro-intestinal, la vessie et l’appareil reproducteur. Aux fins de ce protocole, seul l’examen de la grossesse sera discuté en détail; cependant, l’aspect normal d’autres organes abdominaux caudaux devrait être identifié car ces structures sont susceptibles d’être produites pendant l’étude. Les organes le plus généralement vus dans cet endroit incluent des segments de l’appareil gastro-intestinal, du réservoir souple urinaire, et de l’appareil reproducteur. Le gros intestin et l’intestin grêle sont identifiés par l’aspect caractéristiquement stratifiée de la paroi intestinale. La lumière peut ou non être prononcée selon le type et la quantité de contenu, qui peut inclure des particules de liquide, de gaz, de mucus ou de nourriture. Le réservoir souple urinaire peut être difficile à identifier à moins que distendu avec l’urine, et les couches du mur de réservoir souple sont sensiblement moins distinctes que ceux des intestins. Outre l’utérus, les ovaires peuvent également être trouvés lors de l’échographie de l’appareil reproducteur du muntjac femelle. Les ovaires apparaîtront comme des structures ovoïdes près du pôle caudal des reins, et leur apparence peut changer au cours du cycle œstrus. La présence de multiples follicules mûrs et remplis de fluide dans le cortex est suggestive de l’oestrus.
Remarque : En faisant tourner et/ou en « ventilant » la tête de balayage du transducteur, les structures peuvent être évaluées dans des plans transversaux ou sagittals.- Si nécessaire pour différencier un utérus gravide de la vessie, videz la vessie manuellement en appliquant une pression douce sur l’abdomen caudal ou en plaçant un cathéter urinaire et en répétant la scintigraphie.
Remarque : L’expression manuelle de la vessie ne doit être tentée que lorsque l’animal est en position sternale ou verticale, ce qui facilite une orientation plus naturelle des viscères abdominaux et réduit le risque de traumatisme pour d’autres structures. L’utérus peut également être différencié de la vessie en évaluant l’épaisseur de la paroi de l’organe. L’épaisseur typique d’une vessie modérément distendue est d’environ 1,4 mm24, tandis que les auteurs ont constaté que la paroi plus musculaire de l’utérus gravid dans le muntjac mesure généralement entre 7-8 mm.
Remarque : Il est difficile diagnostiquer la grossesse tôt définitivement dû à un manque de structures foetales identifiables, et en fait la première indication de la grossesse peut simplement être une petite poche liquide dans l’abdomen caudal. S’il est vu à ce moment-là, l’embryon en développement apparaîtra comme une structure hyperéchoïque, ovoïde à amorphe dans l’utérus (Figure 1).
- Si nécessaire pour différencier un utérus gravide de la vessie, videz la vessie manuellement en appliquant une pression douce sur l’abdomen caudal ou en plaçant un cathéter urinaire et en répétant la scintigraphie.
- Apportez des ajustements à la profondeur, à la fréquence et au gain si nécessaire pour améliorer le contraste et les détails de l’image.
Remarque: des fréquences plus élevées sont associées à des longueurs d’onde plus courtes, qui sont nécessaires pour améliorer la résolution de l’image. La plupart des transducteurs sont capables de fonctionner dans une gamme de fréquences (par exemple, 6-10 MHz)24. La fréquence peut être ajustée à l’aide des commandes du scanner sur l’unité à ultrasons, et l’augmentation de la fréquence se traduira par une image plus claire. L’augmentation simultanée de la fréquence diminue la profondeur de pénétration des ondes sonores; par conséquent, la réduction de la fréquence peut être nécessaire pour visualiser des structures plus profondes, mais la résolution peut devenir compromise24. Pour cette raison, il est important de sélectionner la fréquence la plus élevée possible pour atteindre la profondeur de tissu souhaitée. Les réglages des contrôles de gain vont altérer l’amplification des ondes sonores revenant au transducteur à partir des tissus et affecter le degré de contraste dans l’image24. Le gain doit être réglé à un point où le contraste optimal entre les tissus hyperéchoïques et hypoéchoïques est atteint, et ces paramètres peuvent devoir être ajustés en fonction des structures qui sont enticacées.
3. Obtention de mesures fœtales
Note: L’âge gestationnel chez de nombreuses espèces animales domestiques peut être estimé à l’aide de plages de référence établies pour les mesures fœtales obtenues à partir d’un examen échographique. Les mesures les plus couramment utilisées comprennent la longueur droite de la couronne et de la croupe (SCRL), la profondeur de la poitrine (CD) et la longueur de la tête (HL)17. Bien que suffisamment de données n’aient pas encore été recueillies pour élaborer des lignes directrices fiables sur l’âge gestationnel chez le cerf muntjac de Reeves, des mesures peuvent être recueillies afin de commencer à établir ces références. Il a été démontré chez d’autres espèces de cervidés et de ruminants que la fréquence cardiaque fœtale (FHR) augmente linéairement à mesure que la gestation progresse jusqu’à un certain point (généralement vers le 60e jour de la gestation), moment auquel la fréquence cardiaque commence à diminuerde 17. FHR peut être utilisé pour estimer l’âge gestationnel en conjonction avec d’autres observations échographiques, mais il est plus couramment utilisé comme mesure de la viabilité fœtale17,24. Le FHR a été calculé dans le muntjac de Reeves dès 35 jours après l’accouplement observé.
- Pour mesurer scrl, localisez l’utérus sur le moniteur et effectuez de fins ajustements à la position du transducteur jusqu’à ce qu’une vue sagittale de l’ensemble du fœtus soit obtenue(figures 2 et 3). Figez l’image et mesurez la distance entre l’aspect le plus dorsal du crâne et la base du sacrum(figures 2 et 3).
- Pour mesurer la CD, obtenir une vue sagittale du fœtus (la même image peut être utilisée pour mesurer la SCRL) et mesurer la distance entre les aspects dorsaux et ventraux du thorax(figures 2 et 3).
- Pour mesurer le LH, en utilisant la même vue sagittale du fœtus que celle décrite pour les mesures scrl et CD, mesurer la distance entre la crête occipitale et la base du nez(figures 2 et 3).
- Pour calculer la fréquence cardiaque fœtale, identifiez le cœur dans la cavité thoracique du fœtus en visualisant ses contractions rythmiques. Calculez la fréquence cardiaque en comptant le nombre de contractions (battements cardiaques) qui se produisent dans un laps de temps de 1 min.
Remarque : Si l’unité d’ultrason étant utilisée a des capacités de Doppler, cette caractéristique peut être employée pour aider davantage à distinguer le coeur d’autres mouvements foetaux non spécifiques. - Vérifiez que toutes les images et boucles vidéo enregistrées incluent toutes les informations d’identification nécessaires, y compris le nom ou le numéro de l’animal, la date, les mesures et les étiquettes de structure appropriées.
4. Conclusions procédurales et rétablissement
- Retirez tout le gel de contact échographique résiduel de l’abdomen de l’animal à l’aide d’un chiffon doux ou d’essuie-tout. Nettoyez le gel du transducteur avant l’entreposage.
- Si vous utilisez le protocole de sédation décrit à l’étape 1.1, administrer de l’atipamezole par voie sous-cutanée à une dose de 0,25 mg/kg pour inverser les effets de la médétomidine. Si vous utilisez un protocole de sédation différent dans lequel un antagoniste est disponible, administrer cet agent à l’animal selon les doses publiées à la fin de la procédure pour accélérer la récupération.
- Placez le muntjac sur une surface molle en recumbency sternal, avec la tête légèrement surélevée pour réduire le risque de régurgitation et d’aspiration du contenu rumenal. Surveillez l’animal de près jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli et capable de se déplacer autour de l’enclos sans aide.
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Résultats
Utilisant le protocole décrit ici, la grossesse peut être diagnostiquée et surveillée chez reeve' cerf muntjac de s avec des techniques d’une façon minimum invahissantes. Le point de temps le plus tôt que la grossesse a pu être détectée par les auteurs était approximativement 35 jours suivant le comportement d’accouplement observé.
Aux parties de la gestation, la grossesse a été diagnostiquée en visualisant un utérus liquide-rempli identifié comme espace anechoic dans l’abdomen caudal. Dans l’...
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Discussion
Ce protocole décrit l’application de l’échographie de transabdominal pour le diagnostic de grossesse dans Reeves' cerf de muntjac. Compatible avec d’autres études d’ultrason, l’équipement approprié et la compétence technique sont impératifs à un examen reproducteur réussi de la bche de muntjac. L’examen soigneux de l’anatomie de mammifère de base, des principes physiques de l’ultrason diagnostique, et de l’aspect ultrasonographic typique des viscères abdominaux aidera à la réduction des diagnostics erronés. En outre, la ...
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Les auteurs souhaitent remercier Jeanette Hayes-Klug et Kelly Anderson pour la gestion de la colonie de muntjac, le Dr Alan Young pour nous avoir présenté le muntjac et M. Cleve Tedford de Cervid Solutions Inc. pour avoir fourni la graine de muntjac pour ce projet. Ce travail a été soutenu par la subvention R01AI093634 des NIH.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tartrate de butorphanol (Torbugesic) (0,45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
| Tartrate d’azaperone (0,035 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomidine HCl (0,04 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Gel de contact à ultrasons | Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | |
| Chlorhydrate d’atipamézole ( Antisédan) (0,25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finlande | NADA 141-033 | |
| Auge en V (en option) | N/A | N/A | L’animal peut être soutenu en position couchée sur une table d’examen standard ou une autre surface sans l’utilisation d’une auge |
| en V Tondeuses électriques ou lames de rasoir pour l’épilation | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
| Système d’échographie : Échographie portable Ibex Pro | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Sonde Ibex Pro | |
| 5-10 MHz : CL3.8 5-2,5 MHz 60 mm réseau linéaire incurvé | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
| Seringues de 3 ml | Covidien | 1.18E+09 | |
| aiguilles 22 G | Covidien | 8.88E+09 |
Références
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Réimpressions et autorisations
