We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.
Olarak retrograd etiketleme retina ganglion hücrelerinin (RGCs) siteleri ölüyor RGCs somata izole olabilir, bu RGCs hayatta kalma ve rejenerasyon deneylerde RGCs sayma için altın standart haline gelmiştir. Birçok çalışma, optik sinir yaralanmasından sonra RGCs hayatta aratmak için memeli hayvanlarda yapılmıştır. Bazı alternatif yöntemler retina ganglion hücre tabakası (RGCL) hücre sayıları saymak olsa Ancak, yetişkin zebrabalıkları RGCs retrograd etiketleme henüz rapor edilmemiştir. Yetişkin zebrabalıkları kafatasının küçük boyutu ve kafatası üzerinde sondaj sonrası ölüm riski yüksek göz önüne alındığında, biz asit gravür yardımıyla kafatası açık ve önemli ölçüde hayatta kalma oranını getirebileceği bir ışık kür bağ ile delik mühür. 5 gün için boyalar emici sonra, hemen hemen tüm RGCs etiketlenir. Bu yöntem, optik sinir transect gerekmez gibi, yetişkin zebrabalıkları optik sinir ezmek sonra RGCs hayatta araştırma yeri doldurulamaz. Burada, biz tanıtmakBu yöntem, adım adım ve temsili sonuçları sağlar.
Yetişkin zebrabalıkları saymak optik sinir hasarı sonrası 1 aksonlar yeniden güçlü bir yeteneği, uygun bir yöntemi var gibi bütün RGCs RGCs yaşam ve yenilenme 2 değerlendirilmesi esastır. Memeli ve akvaryum balığı 3'te retrograd etiketleme RGCs yöntemlere dayalı – 5, biz yetişkin zebrabalıkları TECTUM gelen RGCs etiketlemek yöntemini inşa. Yetişkin Zebra balığı için, iki kritik teknik endişeler dikkat edilmelidir: yetişkin zebrafish kafatası 6 çok küçük; onlar su ortamında yaşıyoruz. Burada, 5 sondaj ile ilişkili tehlikeleri en aza indirir yanığı ile kafatası tedavi. Sonra, biz ameliyattan sonra hayvan yaşamını geliştirir ışık kür bağı ile delik mühür.
Daha önce, diğer bazı teknikler dolaylı yollarla RGCs saymak kabul edildi. HE retina bölümleri boyama RGCL 7 hücrelerinin her türlü etiketler. Bütün r Antikor etiketlemeBöyle adacık-1 gibi etina, ayrıca amacrine hücreleri 8. etiketleyebilirsiniz. Optik sinir güdük retrograd etiket retinada tüm RGCs etiketleyebilirsiniz olsa da optik sinir ekstra yaralanmasına neden olduğundan, bu ezilme modelinde kabul edilemez. TECTUM gelen retrograd etiket yararlanarak, optik sinir ezilme RGCs yaşam ve yenilenme araştırdım. Sonuçlar hemen hemen tüm RGCs hayatta ve RGCs% 90 üzerinde ezilme modelinde 9 ilk hafta TECTUM rejenere olduğunu göstermektedir.
Başarıyla RGCs etiket için, DII macun birçok ticari boyalarda 10 ile karşılaştırılmasından sonra seçildi. İlk olarak, özellikle in vivo doku etiketleme için tasarlanmıştır. İkinci olarak, bu su içinde yaygın olmayan bir lipofilik boyadır. Ayrıca, bu floresan o RGCs hayatta kalma araştırma için mükemmel bir aday yapar uzun süre devam edebilir.
RGCs retrograd etiketleme memeli hayvanlarda RGCs hayatta araştırma önemlidir, ancak zebrabalıkları kullanılmamıştır. Alternatif yöntemler, HE 7, boyama ve antikor boyama 8, RGCs sayısını saymak için altın standart ve etiketlenmiş tüm RGCs ile transjenik olmayan ama 12, 13, inşa edilmemiştir. Bu videoda, biz yetişkin zebrafish retinada etiket RGCs retrograd bir yöntemi tanıtmak. Akson yaklaşık% 1 koku ampul veya diğer alanların 14 çıkıntı olsa da,…
The authors have nothing to disclose.
This is supported by 973 MOST grant (Grant No. 2011CB504402, 2012CB947602), National Natural Science Foundation of China (Grant No. 91132724, U1332136) and the ‘Hundred Talents Project’ of Chinese Academy of Science. The protocol was approved by the Committee on the Ethics of Animal Experiments of the USTC (Permit Number: USTCACUC1103013).
MS222 | Sigma Aldrich | E10521 | USA |
DiI | Invitrogen | N22880 | USA |
lightcuring bond | Heraeus Kulzer | Durafill bond | Germany |
Gluma Etch | Heraeus Kulzer | Gluma Etch 35 Gel | Germany |
Blue LED | Shenruo Medical Equipment Co. | Power Blue Light Curing Unit | China |