Isolement de cellules souches du cancer à partir d'échantillons cancer de la prostate humaine

Résumé

L'isolement des cellules souches cancéreuses (CCM) directement à partir de tissus humains est nécessaire pour leur caractérisation biologique. Ce manuscrit décrit une méthodologie pour l'isolement des CSC de la prostate à partir de tissus humains, tout en offrant des conseils sur le dépannage des mesures difficiles.

Résumé

Le modèle de cellules souches du cancer (SCC) a été considérablement revu au cours des deux dernières décennies. Pendant ce temps, les CSC ont été identifiés et directement isolé à partir de tissus humains et en série propagé dans des souris immunodéficientes, généralement grâce à l'étiquetage des anticorps de sous-populations de cellules et de fractionnement par cytométrie de flux. Cependant, les caractéristiques cliniques uniques de cancer de la prostate ont considérablement limité l'étude de la CSC de la prostate à partir d'échantillons frais de tumeurs humaines. Nous avons récemment rapporté l'isolement des CSC de la prostate directement à partir de tissus humains en raison de leur classe de phénotype HLA I (HLAI)-négatif. des cellules de cancer de la prostate sont récoltées à partir de pièces chirurgicales et dissociées mécaniquement. Une suspension de cellules est généré et marqué avec des anticorps conjugués HLAI stromales et par fluorescence. Les sous-populations de cellules HLAI négatifs sont finalement isolés en utilisant un cytomètre de flux. La principale limitation de ce protocole est la nature souvent microscopique et multifocalecancer primaire en pièces de prostatectomie. Néanmoins, isolés CSC de la prostate en direct sont appropriés à la caractérisation moléculaire et la validation fonctionnelle par transplantation dans des souris immunodéficientes.

Introduction

Hétérogénéité intratumorale est considérée comme une caractéristique du cancer ^1. En effet, plusieurs mécanismes d'hétérogénéité intratumorale ont été décrites, y compris la mutation génétique et les interactions avec le micro-environnement. En outre, certains cancers peuvent contenir une hiérarchie cellulaire avec une sous-population de cellules souches cancéreuses (CCM) qui présente des propriétés de capacité de la tumeur et initier l'auto-renouvellement dans des essais de transplantation de série ^2-5. Initialement décrit dans hématologique ^6, du sein ^{7, 8} et les tumeurs malignes du cerveau, CCF ont également été ....

Protocole

Une. La récolte et le traitement des tissus de cancer de la prostate humain spécimens chirurgicaux

1. Préparer deux 50 ml polystyrène contenant des tubes coniques de 15 ml de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 du milieu de culture supplémenté avec 10% de sérum fœtal bovin (FBS) et 1% de pénicilline / streptomycine.
2. personnel des services de pathologie récolter des échantillons primaires et métastatiques de la prostate cancer de la prostatectomie et la chirurgie palliative échantillons, respectivement, en vertu d'un Institutional Review Board protocole approuvé. Métastatiques échantillons peuvent être obtenus à partir de ganglions lympha....

Résultats

Figure 1. La récolte de la tumeur du cancer de la prostate de l'humain et de la cytométrie en flux tracé illustrant des populations spécifiques d'un cancer de la prostate humain (A). Nodules tumoraux sont récoltées pour produire une suspension de cellules. contenu de la tumeur de l'échantillon traité est con.......

Discussion

Ce protocole décrit l'isolement de CCF à partir de tissus de cancer de la prostate humain frais. Plusieurs facteurs importants influent sur le succès de ce protocole.

La récupération des nombres élevés de cellules cancéreuses de la prostate viables dépend de l'évaluation brute minutieuse des échantillons chirurgicaux. Dans notre expérience, l'isolement réussi de cellules de la prostate tumorigènes est mieux assurée lorsque nodules tumoraux macroscopiques sont observées et traitée.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
RPMI	Gibco Life Technologies	11875-093
Sérum fœtal bovin	Gibco Life Technologies	10437-028
Pénicilline Streptomycine	Gibco Life Technologies	15140-122
PBS	Corning Cell Gro	21-031-CM
60 mm, 15 mm Boîte de culture cellulaire	Corning	3295
35 & micro; m Filtre cellulaire	BD Falcon	352340
Tube conique de 50 ml	Crystalgen	23-2263
Tube conique de 15 ml	Crystalgen	23-2265
Tampon de lyse des globules rouges	Sigma	R7757
HLA classe I (W6/32) Anticorps PE	Abcam	ab43545
CD31 Anticorps FITC	eBioscience	11-0319-42
CD45 FITC	anticorps Abcam	ab27287
IgG2a&kappa ; Anticorps PE	BD Pharminogen	555574
IgG1&kappa ; Anticorps FITC	BD Pharminogen	551954
DAPI	Invitrogen	d3571
12 mm x 75 mm Tubes en polystyrène avec capuchon de crépine	cellulaire BD Falcon	352235
Vortex Mixer	Crystalgen	CG-BV1000
Tampon neutre à 10 % Formol	Fisher	RBBP-0480