Quantifier simple microvaisseaux perméabilité d'isolement de poumon de rat Préparation du sang perfusé

Summary

La préparation des poumons dans le sang perfusé isolé, il est possible de visualiser des réseaux microvasculaires à la surface du poumon. Ici, nous décrivons une méthode pour quantifier la perméabilité des microvaisseaux simples dans les poumons isolés en utilisant l'imagerie de fluorescence en temps réel.

Abstract

La préparation des poumons dans le sang perfusé isolé est largement utilisé pour visualiser et définir la signalisation dans les microvaisseaux simples. Par couplage de cette préparation avec une imagerie en temps réel, il devient possible de déterminer les changements de perméabilité dans les microvaisseaux pulmonaires individuels. Nous décrivons ici les étapes pour isoler les poumons de rats et de les perfuser avec du sang autologue. Ensuite, nous présentons des mesures pour insuffler fluorophores ou des agents via un micro-cathéter dans une petite région du poumon. L'utilisation de ces procédures décrites, nous avons déterminé perméabilité augmente chez le rat microvaisseaux pulmonaires en réponse aux perfusions de lipopolysaccharide bactérien. Les données ont révélé que le lipopolysaccharide augmenté fuite de fluide dans les deux segments de veinules et capillaires microvaisseaux. Ainsi, cette méthode permet de comparer les réponses de la perméabilité entre les segments vasculaires et ainsi, définir une hétérogénéité dans la réponse. Bien que les méthodes couramment utilisées pour définir la perméabilité pulmonaire post-traitement nécessitent des échantillons de tissus du poumon, leutilisation de l'imagerie en temps réel permet d'éviter que cette exigence évidente à partir de la présente méthode. Ainsi, la préparation du poumon isolé combinée avec l'imagerie en temps réel offre plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles pour déterminer microvasculaire pulmonaire perméabilité, mais est une méthode simple à développer et à mettre en œuvre.

Introduction

Augmentation de la perméabilité microvasculaire dans les poumons entraîne l'apparition d'un œdème alvéolaire et l'échange de gaz compromis et est une caractéristique majeure de lésion pulmonaire aiguë (ALI) ^1-3. Ainsi, les estimations de la perméabilité vasculaire sont importantes pour définir l'étendue des lésions pulmonaires et l'efficacité des interventions thérapeutiques proposées. Analyse gravimétrique comme le sang poumon libre rapport humide à sec et le coefficient de filtration microvasculaire sont largement utilisés méthodes pour estimer la perméabilité ^4,5. D'autres procédés comprennent la quantification de la r....

Protocol

Toutes les expériences réalisées sur des animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux de l'Université du Tennessee Health Science Center.

1. Tubes pour les préparations de perfusion Rat poumon

1. Préparer un système de tuyauterie avec un tube Tygon (# 18) pour la perfusion de sang comme le montre la Figure 1. Raccorder les capteurs de pression (P23XL) et placer le tube sur la platine du microscope.
2. Régler la température du bain d'eau à 37 ° C.
3. Connectez l'entrée du poumon et de sortie temporairement Tygon.

Results

Une préparation de poumon de sang perfusé isolé relié à la tubulure de perfusion et de l'équipement correspondant est représenté sur la figure 2. Des fins de démonstration, nous avons utilisé un rat Sprague Dawley, bien que les modes opératoires décrits ici peuvent être utilisés avec n'importe quelle espèce de rat. Infusions à travers un microcathéter auriculaire gauche atteignent seulement une petite région du poumon. La région infusé peut être identifié par la coloration induite par la perfusion

Discussion

La préparation du poumon sang perfusé isolé couplé avec l'imagerie en temps réel fournit un outil simple pour la détermination des changements de perméabilité dans les microvaisseaux pulmonaires simples. Nous avons appliqué cette méthode pour définir les changements de perméabilité en réponse aux perfusions de LPS. Nos données indiquent clairement que l'infusion de LPS a provoqué une augmentation de la perméabilité microvasculaire. En outre, les données indiquent également que les modifications de la perméabilit.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tygon Tubing	Fisher Scientific		#18
Transducteur	de pression Data Sciences International	P23XL	Besoin quantité de 3
Butterfly Needle	Greiner Bio-One 450081		21 G
Pompe péristaltique	Cole Parmer	Masterflex L/S
PE-90 tubing	Becton Dickinson	427421	besoin de 30 cm
Tube PE-10	Becton Dickinson	427401	40 cm nécessaire
Pompe à seringue	Braintree Scientific	BS8000
Joint			Fabriqué sur mesure avec un trou de diamètre de 20 mm et une poignée pour fixer le joint torique au support
Microscope à fluorescence droit Olympus	America	BX61WI
Logiciel d’acquisition d’images	Dispositifs moléculaires	Metamorph
FITC Dextran 20KD	Sigma Aldrich		0,5 mg/ml (Un dextran de taille moléculaire différente peut être sélectionné, si les expériences d’essai indiquent qu’il convient sur la base des valeurs de l’indice de perméabilité calculées)  ;
Lipopolysaccharide	Sigma Aldrich		Sérotype 0111 :B4