L'évaluation de la physiologie respiratoire a traditionnellement compté sur des techniques, qui nécessitent une contention ou sédation de l'animal. Effrénée pléthysmographie corps entier, cependant, fournit une analyse précise et non invasive, quantitative de physiologie respiratoire dans des modèles animaux. En outre, la technique permet une évaluation répétée de souris respiratoire permettant d'études longitudinales.
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Article de méthode
Mesure de la fonction respiratoire chez la souris utilisant effrénée pléthysmographie corps entier
Dans cet article
Résumé
Résumé
Dysfonctionnement respiratoire est l'une des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde et les taux de mortalité continuent d'augmenter. L'évaluation quantitative de la fonction pulmonaire chez les rongeurs est un outil important dans le développement de futures thérapies. Communément utilisé des techniques pour évaluer la fonction respiratoire, y compris pléthysmographie invasive et oscillation forcée. Bien que ces techniques fournissent des informations précieuses, la collecte de données peut être lourde avec des objets et de la variabilité expérimentale en raison de la nécessité d'une anesthésie et / ou instrumentation invasive de l'animal. En revanche, sans retenue pléthysmographie corps entier (UWBP) offre un moyen quantitatif précis, non invasif qui pour analyser les paramètres respiratoires. Cette technique permet d'éviter l'utilisation de dispositifs de retenue et l'anesthésie, qui est commun aux techniques traditionnelles de pléthysmographie. Cette vidéo montrera la procédure UWBP y compris l'équipement mis en place, l'étalonnage et les poumons fonction enregistrement. Ilexpliquera comment analyser les données recueillies, ainsi que d'identifier les valeurs aberrantes expérimentales et des objets qui résulte de mouvements d'animaux. Les paramètres respiratoires obtenus en utilisant cette technique comprennent le volume courant, le volume minute, le rapport cyclique inspiratoire, le débit inspiratoire et le rapport du temps d'inspiration au temps d'expiration. UWBP ne repose pas sur des compétences spécialisées et est peu coûteux. Une caractéristique clé de UWBP, et plus attrayant pour les utilisateurs potentiels, est la possibilité d'effectuer des mesures répétées de la fonction pulmonaire sur le même animal.
Introduction
Dysfonction du poumon est l'une des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde. La condition est caractérisée par l'échange d'oxygène insuffisante, synonyme de la toux, des douleurs thoraciques et dyspnée. Les maladies respiratoires pour ~ 10% de mortalité dans le monde 1. Selon l'Organisation mondiale de la santé, les taux de mortalité vont augmenter à cause du tabagisme persistant, la pollution et les irritants au travail. UWBP est un complément utile pour l'étude de la physiologie du poumon, qui complète fortement biochimique traditionnelle et analyse histologique 2. D'autres procédures utilisées pou....
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Protocole
REMARQUE: La procédure expérimentale suivante est approuvé par le Comité d'éthique animale à l'Université Monash et réalisée conformément aux dispositions du Code australien de pratiques pour le soin et l'utilisation des animaux à des fins scientifiques (2006). Adultes C57BL / 6 femelles souris utilisées pour générer les résultats représentatifs ont été obtenues à partir des Services animaliers de Monash. Les souris ont été logées dans un local spécifique de l'agent pathogène, température et humidité contrôlées avec un cycle de lumière-obscurité de 12 heures. Ces souris avaient un accès libre à la nourriture et de l'eau.
1 Configuration init....
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Résultats
Lorsque cette procédure a été correctement suivie, une trace d'oscillation cohérente est créé sur le logiciel d'analyse de données. La procédure prévoit une trace des voies respiratoires en quelques minutes après l'installation des calculs informatiques simples pour déterminer les paramètres respiratoires énumérés. Figure 5 représente une trace respiratoire approprié d'une gestion de la souris (en bonne santé). Données oscillant approprié est produit lorsque l'animal ne bouge pas act.......
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Discussion
La technique décrite ici est une méthode non-invasive pour l'évaluation des paramètres respiratoires des souris effrénés et non anesthésiés. Les points forts de ce protocole sont sa simplicité et de précision pour mesurer la fonction pulmonaire longitudinalement avec des objets minimaux. Il ya, cependant, des limitations et des étapes critiques à noter à propos de la procédure. Tout d'abord et surtout, la souris doit rester calme dans la chambre pour un minimum de cinq secondes. Stress supplémentaire va perturbe.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts concurrents. Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Nous tenons à remercier le Prof. David Walker pour ses conseils techniques et la fourniture d’équipement dans le développement de cette technique. Ce travail est soutenu par le programme de soutien à l’infrastructure opérationnelle du gouvernement de Victoria. Ce travail a été en partie soutenu par le programme de soutien à l’infrastructure opérationnelle du gouvernement de Victoria.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Logiciel LabChart 7 (pour Macintosh) | ADINSTRUMENTS | MLU60/7 | utilisé à l’étape 4 |
| du protocole PowerLab 8/30 (modèle ML870) | ADINSTRUMENTS | PL3508 | |
| Octal Bridge Amp (modèle ML228) | ADINSTRUMENTS | FE228 | |
| Noir BNC vers BNC (1 m) | ADINSTRUMENTS | MLAC01 | |
| Macintosh OS | Apple Inc. | Mac OS X 10.4 ou version ultérieure | |
| Surgipack Thermomètre rectal numérique | Vega Technologies | MT-918 | |
| Transducteur de pression volumétrique d’herbe PT5A | Grass Instruments Co. | Numéro de modèle PT5A, n° de série L302P4. | |
| Seringue de 1 ml | Becton Dickinson (BD) | 309628 | |
| Pipettes seringues sérologiques de 5 ml | Greiner Bio One | 606160 | Connectée par un tube en plastique |
| Balance/Balances | VWR International, Pty Ltd | SHIMAUW220D | Toute balance de pesée d’une résolution de 0,1 gramme |
| HM40 Hygromètre et thermomètre | Vaisala | HM40A1AB | |
| Baromètre | Baromètre World | 1586 | |
| Tube de laboratoire | Dow Corning | 508-101 | Utilisé pour connecter la colonne d’eau à la seringue et au transducteur de pression |
| Chambre cylindrique en plexiglas | Dynalab Corp. | Chambre cylindrique sur mesure avec les dimensions intérieures suivantes : 50 mm (L) x 1 500 mm (L). Il y a deux couvercles de chaque côté, de dimensions 80 mm (l) x 80 mm (l). Chaque couvercle a un trou circulaire de 60 mm de large découpé sur la face du couvercle de 50 mm de profondeur. Cela permet à la chambre de s’insérer dans le couvercle. Un anneau en caoutchouc est installé autour de chaque trou du couvercle où la chambre s’adaptera. Pour la fixation de la seringue et du transducteur de pression, les ouvertures ont un diamètre de 5 mm. Pour la fixation de la sonde d’humidité, les ouvertures ont un diamètre de 25 mm. | |
| 80 % éthanol (4 L) | VWR International, Pty Ltd | BDH1162-4LP |
Références
- World Health Organization, World Health Statistics. , WHO, Geneva, Switzerland. (2008).
- Jones, C. V., et al. M2 macrophage polarization is associated with alveolar formation during postnatal lung development. Respir. Res. 14 (41), 14-41 (2013).
- Campbell, E., et al.
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Réimpressions et autorisations
