Une installation de poisson zèbre adaptée à la reproduction et à la recherche in vivo est construite de manière simple et abordable. L’entretien est minimal. Cette installation est idéale pour l’implication des étudiants et la recherche indépendante.
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Article de méthode
Construction d'un Construire facile à l'installation de poisson zèbre et abordable
Dans cet article
Résumé
Résumé
In vivo la recherche biomédicale est essentiel pour traduire dans les résultats in vitro dans les avancées cliniques. Les petits établissements universitaires avec des ressources limitées trouver qu'il est pratiquement impossible de construire et d'entretenir les installations typiques de rongeurs pour la recherche. La recherche du poisson zèbre a été démontré pour être une alternative intéressante pour la recherche in vivo en pharmacologie, la physiologie, le développement et les études génétiques. Cet article montre qu'une installation poisson zèbre fonctionnel peut être construit d'une manière facile et abordable. Nous démontrons qu'une telle installation pourrait être construit dans environ un jour travailler avec des outils et de l'expertise minimes. Le coût de la 27 1,8 L installation de poisson zèbre de réservoir de poissons construit dans cette étude était d'environ $ 1500. Nous estimons que le maintien d'une colonie initiale de poisson travail 150 pour trois mois est de 1000 $. Ce projet consistait étudiants, qui ont été introduites à aquaculturing de poisson zèbre pour la recherche propose.
Introduction
In vivo modèles sont essentiels dans la conduite de la recherche biomédicale globale car ils permettent à la recherche in vitro à traduire au niveau du système et organismal. Par exemple, la recherche de petits mammifères, à savoir les rongeurs, a été avéré nécessaire dans le développement de médicaments et à l'amélioration des médicaments disponibles. Cependant, la complexité (financièrement et logistiquement) pourrait rendre pratiquement impossible à construire et à entretenir les installations de rongeurs d'expérimentation propose aux petites institutions universitaires de recherche. Néanmoins, la recherche in vivo peut être effectuée en utilisant d'autres espèces animales qui nécessitent une logistique moins élaborés. Poisson zèbre (Danio rerio) ont été utilisés avec succès comme un modèle in vivo pour étudier la génétique, le développement, la physiopathologie et pharmacologie 1,2,10,11,12. Les installations requises pour accueillir le poisson zèbre pour l'expérimentation sont relativement simples et beaucoup moins cher par rapport aux rinstallations Odent. Kim et al. 3 ont récemment décrit en détail un système de logement poisson zèbre 80 du réservoir qui peut être construite pour environ $ 1500, qui comprend les deux parties et les coûts de main-d'œuvre. Ceci est en contraste frappant avec la presque $ 8,500 qui serait nécessaire pour acheter un système de réservoir 80 ready-made de tout nombre de fournisseurs commerciaux. Toutefois, la description donnée par Kim et al. peut être compliqué et difficile à suivre pour les novices de la recherche de poisson. Nous croyons qu'une installation poisson zèbre peut être construit de manière simplifiée pour un investissement de $ 1500.
La mise en place d'une installation in vivo à des petits établissements universitaires fournit leurs facultés un outil supplémentaire avec laquelle de produire une recherche plus puissant et complet. Les données in vitro soutenues par résultats in vivo généralement produire la recherche biomédicale plus complète que les données obtenues en utilisant seulement des approches in vitro. Par conséquent, lamise en œuvre d'un centre de recherche in vivo améliorera considérablement le succès de l'institution dans ses efforts de recherche globaux (de l'exposition des étudiants à la recherche, publications, communications, recherche de financement externe, etc.).
La construction d'une installation de poisson zèbre comme celle décrite dans cette étude est idéale pour les établissements universitaires de recherche avec des moyens limités (ou institutions sans in vivo installations de recherche) au cours de constriction fois financiers.
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Protocole
NOTE: Ces protocoles suivent les directives de IACUC du Presbyterian College.
1. Matériaux Acquérir énumérées dans le tableau 1.
2. Assembler le plateau 5 Chrome Selon les instructions du fabricant. Cela être utilisés pour héberger le Fonds.
3. Construction du réservoir d'eau et un système de filtration (figures 1A et 2).
- Aide de la figure 1A comme un guide, mise en page le seau de 18 gallons, pompe, filtres et lampe UV pour déterminer l'emplacement d'installation et la taille finale.
- Une fois que les pièces sont disposées, mesurer et couper le tuyau de PVC ¾ "à la longueur nécessaire pour l'assemblage. Variez les longueurs de toutes les conduites en fonction des besoins et des contraintes d'espace spécifiques.
- Assemblez les tuyaux et les raccords comme prévu précédemment en utilisant l'amorce PVC et de ciment, voir ci-dessous (3.3.2 et 3.3.3).
- Poncer les bords de la pipe avec du papier de verre coupées jusqu'à ce qu'ils soient lisses à l'un tactiled il n'y a pas de débris.
- Premier l'extérieur du tuyau et l'intérieur de la ferrure avec l'amorce PVC acheté avec l'écouvillon inclus à partir de l'amorce PVC.
- Collez le tuyau et le raccord ensemble par l'application de la colle à PVC à l'extérieur de la conduite en utilisant l'écouvillon inclus. Répétez l'opération pour toutes les mesures qui doivent cimentation de PVC.
- Placer le godet 18 gallons d'un côté de la construction du plateau.
- Installer un connecteur de cloison du côté du réservoir.
- Fixez un tuyau en PVC ¾ "à la cloison.
- Branchez l'autre extrémité du ¾ "pipe à l'entrée de la pompe en utilisant un ¾" filetée faire raccord.
- Connecter les filtres à la pompe à l'aide de deux coudes de 90 degrés et ¾ "tuyau en PVC.
- Utilisez un filtre de papier suivi d'un filtre à charbon actif pour filtrer les débris et réduire les niveaux de chlore et de produits chimiques dans l'eau.
- Connectez la lampe UV à l'filtres according aux instructions du fabricant.
- Fixez la pompe et système de filtration à la face supérieure de la première étagère de l'armoire en utilisant les liens de fil. Variez l'ordre de l'assemblage et fixation selon la taille et la disposition de la tablette / support choisi.
- Ajouter une BioBall par gallon d'eau au réservoir d'eau, une fois la pompe et le système de filtre sont assemblés et fixés à l'étagère.
4. Construire la ligne principale d'alimentation (figures 1B et 2).
- Mesurer et couper un morceau de ¾ "tuyau en PVC pour connecter la lampe UV à l'alimentation principale
- Utilisez un "té en PVC pour commencer la ligne d'alimentation principale en connectant le tee au ¾" ¾ PVC échappement provenant du filtre UV. .
- Ajouter une soupape de marche-arrêt vers le bas du tee PVC pour servir de drain pour l'entretien du système de rinçage.
- Lancer la ligne principale d'alimentation par le haut de la ¾ "té en PVC en mesurant et en coupe ¾" PVCtube à la longueur désirée pour fournir des tuyaux d'alimentation de chacune des étagères sur le rack.
- Installez ¾ "tees de PVC pour les lignes horizontales qui entreront chaque étagère de l'armoire.
- Éventuellement (et suggéré), ajouter un ¾ "on-off valve pour chaque ligne d'alimentation du plateau pour permettre l'isolement de chaque étagère et une conception modulaire du système.
- Utilisez un tuyau en PVC ¾ "comme un réducteur de pression en ligne sur l'étagère du haut. Si cette ligne se exécute sur l'arrière de la tablette, utiliser cette étagère pour le stockage. Fin de la réduction de pression ligne dans la ligne d'échappement principale (figure 1B) avec un ¾ "vanne on-off.
- Une fois les étapes ci-dessus ont été réalisés, le premier et cimenter le tuyau en PVC ensemble comme déjà fait lors de la construction du système de réservoir et filtration.
5. Construire la ligne principale d'échappement (figures 1C et 2).
- Exécuter la longueur verticale de la conduite principale d'échappement de l'autre côté de la crémaillère fepuis la ligne d'alimentation principale. Utilisez un tuyau 2 "en PVC pour cette ligne verticale pour recevoir la ligne d'alimentation principale sur les lignes du haut et du drainage des réservoirs de poissons de chaque étagère.
- Couper les morceaux de 2 "tuyau en PVC pour la ligne d'échappement principale verticale et utiliser deux" t-shirts en PVC pour recevoir le réservoir de poissons conduites de vidange de chaque étagère. Fin de la ligne d'échappement principale dans le réservoir de stockage d'expulser l'eau recyclée sur un filtre éponge.
- Couper une ouverture sur toute la longueur des deux "morceaux de tuyaux en PVC d'un pouce et joindre à la ligne d'échappement principale verticale avec tees PVC pour les lignes horizontales de vidange des réservoirs de poissons.
- Boucher les deux "lignes de drain horizontal avec deux« plafond de PVC.
- Premier et cimenter les pièces en utilisant les accessoires nécessaires (connecteurs, mamelons ou coudes).
6. Construire les réservoirs de poissons (figure 3).
- Avec la perceuse, couper un «trou à l'arrière de l'aquarium 1" 1 1/8 dessous du bord supérieur avec une scie de trou.
- glisser une ¾ "PVC adaptateur fileté mâle (avec une bague 18 # O-joint) au travers du trou (de l'intérieur de la cuve à l'extérieur).
- Fixez et serrez un 90 degrés 3/4 "fileté coude PVC à l'adaptateur mâle pour créer le tuyau d'échappement de réservoir de poissons. Ajouter un morceau de maille fine avant de visser l'écrou de retenue pour empêcher le poisson zèbre en passant par le système d'échappement.
- Placez le réservoir de poissons avec son fin du tuyau d'échappement dans l'espace ouvert de la ligne de drainage derrière les chars
7. Démarrage du système de l'eau
- Dans plusieurs récipients, tels que celui utilisé pour le réservoir, mesurer trois fois la quantité d'eau contenue dans le système. Laissez cette eau reposer à température ambiante pendant conditionné pendant 48 heures.
- Ajouter de l'eau au système et le laisser circuler pendant un minimum de trois jours.
- Changez l'eau dans le système vigoureusement durant les 3 premiers jours de la circulation afin de débarrasser le système de contaminants that résident dans les tuyaux.
- Ajouter le poisson zèbre démarrage et laisser le cycle de l'azote de se établir. Normaliser pH à une politique cohérente 7. Gardez sept poisson zèbre par 1,8 L, et de les nourrir deux fois par jour en semaine et une fois par jour le week-end comme suggéré par Linbo 4 et 6 McNabb.
- Surveiller le nitrate (<75 mg / L), le nitrite (<10 mg / L), et d'ammonium (0 mg / L) par jour pendant la première semaine après l'ajout de poissons, et des niveaux deux fois par semaine, une fois escomptés ont été maintenus avec des changements réguliers de l'eau .
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Résultats
La construction du système de pompe et fltres
Une fois le rack est assemblé et mis en place la première étape est de construire le système de pompe et le filtre. Les filtres sont reliés à la pompe du système et sont situés au-dessus du niveau bas de la première étagère, ce qui permet un entretien facile du filtre et le remplacement. De même, la lampe UV est relié à un tuyau en PVC au filtre et maintenu en place avec attaches en plastique pour permettre le remplacement facile de la lampe UV au besoin
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Discussion
Le but principal de cet article est de démontrer que la construction d'une installation fonctionnelle poisson zèbre ne est pas compliqué et peut être construit par les chercheurs de poissons débutants ayant une connaissance minimale de la construction. En outre, cet article montre que les matériaux pour cette installation poisson zèbre fonctionnelle peuvent être acquises facilement et à moindre coût dans les magasins de fournitures pour animaux locaux ou les quincailleries. Une fois que tous les matériaux et les out...
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent aucun conflit d'intérêt pour le présent document.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier le Bureau de la recherche du Presbyterian College School of Pharmacy de soutien financier de ce projet à travers les bourses petite pharmacie pour la recherche & Collaboration (SPARC) Award. Les auteurs remercient M. John Smink, directeur du Laboratoire de recherche des animaux aquatiques, Clemson University, Clemson, SC pour sa révision technique assistance manuscrit.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Marque de | l’article | Quantité | |
| 74 po H x 48 po L x 18 po P Étagère autoportante en acier à 5 étagères | Sélections | ||
| 1 seau/fourre-tout général de 18 gallons | Centrex Plastics : LLC ; Fourre-tout robuste | 1 | |
| multiprise à 6 prises avec cordon de 15 pieds | Maître électricien | 1 | |
| clarificateur de jardin à eau UV de 9 watts et lampe UV | Smartpond | ||
| Filtre de remplacement de l’eau pour toute la maison | Whirlpool | 6 | |
| Boîtier de préfiltration opaque pour toute la maison | Whirlpool | 2 | |
| filets | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC | Ciment Oatey ; | ||
| fl oz LO-VOC Primer | Oatey ; | ||
| 1/4 po x 100 pi Vinyle Tuyau de distribution d’irrigation goutte à goutte Monsieur | Paysagiste ; | ||
| 1/4 po Barbé Irrigation goutte à goutte On/Off Valve Mister | Landscaper | 33 | |
| Collecteur d’irrigation NPT à 9 ports avec filtre | ; Mister Landscaper | 6 | |
| Filtre Insérable avec Maison ; | Whirlpool | 6 | |
| Coude en PVC à 90 degrés de 2 po de diamètre | LASCO | 3 | |
| Té à 90 degrés de 2 po de diamètre | LASCO | Coude | |
| 3/4 po de diamètre | LASCO | 15 | |
| 3/4 po de diamètre | LASCO | Té | |
| 3/4 po de diamètre | LASCO | 12 | |
| Capuchon en PVC de 2 po de diamètre | LASCO | 3 | |
| Adaptateur en PVC de 1 po de diamètre x 3/4 po de diamètre | LASCO | ||
| po | Valve américaine | ||
| 1/2 po de diamètre x 3/4 po de diamètre Lasco Capuchon | 8 | ||
| 3/4 po de diamètre | Lasco | 1 | |
| tuyau en PVC de 2 po x 5 pi Tuyau | Charlotte Tuyau | de 4 | |
| po x 10 pi | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 anneau en PVC | SXT | 10 | |
| ½ ; ” Adaptateur mâle en PVC | SXT | 1 | |
| ¾ ; ” accouplement en PVC ; | SXT | 1 | |
| et frac 12 ; ” Adaptateur femelle en PVC ; | SXT | 1 | |
| lien | |||
| 1,8 L Dual Beta Keeper | Aileron | supérieur 27 | |
| ¾ ; ” Adaptateur mâle en PVC (avec joint torique #18) | SXT | 28 | |
| 90 degrés ¾ ; ” coude fileté en PVC | SXT | 27 | |
| Maille fine | N/A | 1 yard | |
| Connecteur de cloison | N/A | 1 | |
| Scie à métaux | N/A | 1 | |
| Perceuse | N/A | 1 | |
| Scie cloche | N/A | 1 | |
| Clé à molette | N/A | 1 | |
| Pinces | N/A | 1 | |
| Ruban à mesurer | N/A | 1 | |
| Lunettes de sécurité | N/A | 1 | |
| Gants de travail | N/A | 1 |
Références
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
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Réimpressions et autorisations
