Mesure de l'anaphylaxie locaux chez la souris

Résumé

Les réponses allergiques, caractérisé par l'activation des mastocytes et des basophiles, sont entraînés par la reticulation d'IgE et la libération de médiateurs pro-inflammatoires. Une évaluation quantitative de réactions allergiques peut être obtenue en utilisant le colorant bleu d'Evans pour suivre l'évolution de la perméabilité vasculaire après provocation allergénique.

Résumé

Les réactions allergiques sont le résultat de l'activation des mastocytes et les basophiles, et la libération subséquente de médiateurs pro-inflammatoires et vasoactifs. L'exposition à un allergène chez un individu sensibilisé peut entraîner des symptômes cliniques qui varient de l'érythème mineur à la vie en danger anaphylaxie. Au laboratoire, différents modèles animaux ont été mis au point pour comprendre les mécanismes d'entraînement des réactions allergiques. Nous décrivons ici un procédé détaillé destiné à mesurer les changements dans la perméabilité vasculaire de quantifier les réponses allergiques localisées. Le dosage de l'anaphylaxie locale a été signalée pour la première dans les années 1920, et a été adapté à partir de la technique publié par Kojima et al. en 2007 ^1. Dans cet essai, des souris sensibilisées à l'OVA sont contestées dans l'oreille gauche avec le véhicule et dans l'oreille droite avec l'OVA. Ceci est suivi par une injection intraveineuse de colorant bleu d'Evans. Dix minutes après l'injection de bleu d'Evans, l'animal est euthanasie et le colorant qui s'est épanché danspour les oreilles est extraite pendant une nuit dans du formamide. L'absorbance du colorant extraite est ensuite quantifiée avec un spectrophotomètre. Cette méthode permet de manière fiable une manifestation visuelle et quantifiée d'une réaction allergique locale.

Introduction

Je hypersensibilité de type est médiée par l'antigène induit la reticulation de l'IgE à la surface des mastocytes et des basophiles. Cela se traduit par une dégranulation cellulaire et la libération de médiateurs vasoactifs et pro-inflammatoires telles que l'histamine, la tryptase, et le facteur d'activation des plaquettes ^2. Après la libération de médiateurs préformés pendant la dégranulation, les mastocytes synthétisent et libèrent des prostaglandines et leucotriènes, qui augmentent encore la perméabilité vasculaire ^3. La réponse clinique initiale se produit rapidement et est appelé une "réaction immédiate". Dans la peau, une r....

Protocole

1. souris Sensibiliser

1. Préparer une solution stock OVA par dilution de l'OVA en 1x PBS à une concentration finale de 20 mg / ml. Congeler bas aliquotes dans des cryotubes et conserver à -80 ° C pour une utilisation future.
2. Apportez un ou plusieurs aliquotes de 20 mg / ml OVA actions à la température ambiante. Diluer OVA dans du PBS 1x à une concentration finale de 1 mg / ml dans un tube en polystyrène de 5 ml à fond rond avec un capuchon. Vortex brièvement pour mélanger.
3. Tout en maintenant le tube en polystyrène contenant 1 mg / ml OVA sur un vortex réglé à vitesse moyenne, ajouter un volume égal de bien homogénéisé Imject alun (40 ....

Résultats

Les animaux qui ont subi le test avec succès auront la peau et les yeux qui apparaissent en bleu. PBS animaux sensibilisés ne doivent pas réagir à PBS ou le défi de l'OVA, donc les deux oreilles doivent rester blanc (figure 1A). Chez les animaux sensibilisés OVA, l'oreille recevoir le défi PBS (à gauche) doit être soit complètement blanc ou légèrement bleu de façon localisée au niveau du site d'injection. L'oreille recevoir le défi OVA (à droite) devrait devenir progressivement plus sombre bleu pendant .......

Discussion

De nombreux marqueurs de la maladie allergique sont utilisés pour évaluer la force des réactions allergiques suivantes provocation allergénique, y compris les changements dans les niveaux d'histamine circulation, production de cytokines Th2, et le recrutement de cellules dans le liquide broncho dans le cadre de défi des voies respiratoires. Tout en surveillant les changements de ces paramètres est important pour l'étude des réactions allergiques, des marqueurs biologiques ne correspondent pas toujours à la malad.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Souris BALB/c	The Jackson Laboratory	651
PBS pH 7,4	Qualité Biologique	114-058-101
Ovalbumine	Sigma	A5503-10G
Imject Alun	Thermo Scientific	77161	Bien mélanger avant utilisation
Evans Blue Dye	Sigma	E2129
Formamide	Sigma	295876	99 %+ Isoflurane de qualité spectrophotométrique
, USP	Phoenix	NDC 57319-474-06
1cc Seringues à insuline	BD	329654
3/10 cc Seringue à insuline avec aiguille 31 G	Terumo	NDC 100861
27 G Aiguilles	BD	305109
Pince	F.S.T.	11000-12
Ciseaux chirurgicaux	F.S.T.14070-12
5 ml Tubes en polystyrène à fond rond	BD Falcon	352058
1,5 ml Tubes à centrifuger	Partenaires médicaux	15-1151
15 ml Tubes coniques	BD Falcon 352097
Flat-bottom 96 well plate	Costar	3590
Scotch
tape RC2 Système d’anesthésie pour rongeurs	VetEquip	922100
Vortex Genie 2	Scientific Industries	SI-0236	Modèle G560 avec plate-forme de 3 pouces