Un protocole est développé pour examiner les effets d’un médicament épigénétique DZNep sur le développement, la fécondité et la survie des moustiques. Nous décrivons ici les procédures d’exposition aqueuse de DZNep aux moustiques immatures et d’exposition sanguine de DZNep aux moustiques adultes, en plus de mesurer l’inhibition de l’hydrolase de l’HSA.
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Article de méthode
Les analyses toxicologiques pour Effets d'essais d'un médicament épigénétique sur le développement, la fécondité et de la survie du paludisme moustiques
Dans cet article
Résumé
Résumé
Résistance insecticide pose un problème majeur pour les programmes de lutte contre le paludisme. Les moustiques se adapter à un large éventail de changements dans l'environnement rapidement, faire du paludisme contrôler un problème omniprésent dans les pays tropicaux. L'émergence de populations résistantes aux insecticides justifie l'exploration de nouvelles voies de cibles de médicaments et composés pour le contrôle des moustiques vecteurs. Médicaments épigénétiques sont bien établis dans la recherche sur le cancer, mais pas beaucoup est connu au sujet de leurs effets sur les insectes. Cette étude fournit un protocole simple d'examiner les effets toxicologiques de 3-déazaneplanocine A (DZNep), un médicament épigénétique expérimental pour le traitement du cancer, sur le vecteur du paludisme, Anopheles gambiae. Une augmentation dépendante de la concentration de la mortalité et de diminution de la taille a été observée chez les moustiques immatures exposés à DZNep, alors que le composé réduit la fécondité des moustiques adultes par rapport au témoin traitements. En outre, on observe une diminution de toxicomanes en S -adénosylhomocystéine (SAH) activité hydrolase chez les moustiques après une exposition à DZNep rapport à contrôler traitements. Ces protocoles prévoient le chercheur avec une procédure simple, étape par étape pour évaluer plusieurs paramètres toxicologiques pour un médicament expérimental et, à son tour, de démontrer une approche unique multi-broches pour explorer les effets toxicologiques des médicaments ou composés de épigénétiques solubles dans l'eau intérêts contre les moustiques vecteurs et autres insectes.
Introduction
Le paludisme est responsable pour le plus grand nombre de décès liés à insectes dans le monde. Quelque 219 millions de cas se produisent chaque année dans le monde, entraînant environ 660 000 décès, principalement en Afrique 1. Malgré les efforts concertés, les programmes de lutte contre le paludisme sont confrontés à plusieurs défis. Bien que les moustiquaires imprégnées d'insecticides à effet rémanent dans les composants et sous forme de pulvérisation de clés du programme, la résistance aux insecticides chez les populations locales entravent ces efforts 2. L'augmentation rapide des populations de moustiques résistants aux insecticides ....
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Protocole
NOTE: Les trois parties du protocole décrivent l'exposition aqueuse du médicament DZNep à larves de moustiques, une exposition sur la base de sang de DZNep aux femelles adultes pour étudier son effet de la fécondité, et SAH hydrolase inhibition par DZNep mesurés en utilisant une technique colorimétrique simple. Une représentation schématique de ces essais est représenté sur la Figure 1.
1. immatures développement Mosquito et la survie dosages
NOTE: Cette section explique l'utilisation d'un médicament soluble dans l'eau qui affecte le développement des larves de moustiques et de s....
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Résultats
La figure 1 est une représentation schématique des essais; il décrit les différentes étapes de la procédure indiquée dans cet article. Comme le protocole est basé sur les différents stades de vie des moustiques, il n'y a pas séquence particulière à suivre pour les expériences détaillées ici. L'utilisateur peut choisir d'effectuer un ou plusieurs tests en même temps, en fonction de la disponibilité des échantillons.
La Figure 2 montre la plaque mis en .......
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Discussion
Il ya plusieurs étapes essentielles à la bonne application de ce protocole. Pour le dosage des larves, il faut prendre soin d'étiqueter correctement et de reproduire chaque concentration d'essai. Randomisation échantillons d'essai et en ajoutant le montant désigné de médicament à des puits d'essai respectifs est une partie importante de ce dispositif expérimental mis en place. Avant d'ajouter 2 ème stade larvaire des moustiques à une microplaque de 96 puits, chaque larve peut être mis sur .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions Victor Marquez d’avoir fourni DZNep.HCl et Scotty Bolling d’avoir fabriqué les alimentateurs de sang. Les souches Mopti et SUA2La d’An. gambiae ont été obtenues auprès du Centre de recherche sur le paludisme et de ressources sur les réactifs de référence (MR4). Ce travail a été soutenu par le Fralin Life Science Institute et la subvention des National Institutes of Health 1R21AI094289 à Igor V. Sharakhov.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Microplaque à 96 puits | Fisher Scientific | 12565561 | |
| Plaque de culture cellulaire | CytoOne | CC7682-7506 | |
| Centrifugeuse | Sorvall Fresco | 76003758 | Une autre centrifugeuse peut être utilisée |
| Rouleaux de ruban coloré | Fisher | S68134 | |
| Microscope de dissection | Olympus | SZ | |
| DTNB | Sigma Aldrich | D8130 | |
| DZNep.HCl | Sigma Aldrich | SMLO305 | |
| Gobelets | |||
| Papiers filtres | Fisher | 09-795E | |
| Mangeoires en verre | Virginia Tech | ||
| Homogénéisateur | |||
| Élément chauffant | Fisher Scientific | NC0520091 | |
| Incubateur | Percival scientific | I36VLC8 | Un autre incubateur peut être utilisé |
| Tube de microcentrifugation, 2 ; ml | Axygen | 22-283 | |
| Tube de microcentrifugation, 1,5 ml | Axygen | MCT-150-C | |
| Micropipette | Eppendorf | 4910 000.069 | |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | M-3154 | |
| NaH2PO4 | Fisher Scientific | M-8643 | |
| pH-mètre ; | Mettler Toledo 7easy | S20 | |
| Lecteur de plaques | Spectramax | M2 | |
| SAH | Sigma Aldrich | A9384 | magasin à -20 ° ; C |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 |
Références
- CDC Report. , Available from: http://www.cdc.gov/malaria (2010).
- Gatton, M. L., et al. The importance of mosquito behavioural adaptations to malaria control in Africa. Evolution; International Journal of Organic Evolution. 67, 1218-1230 (2013).
- Sternberg, E. D., Thomas, M. B.
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Réimpressions et autorisations
