Simultanée électrophysiologique Enregistrement et micro-injections d'agents inhibiteurs dans le cerveau des rongeurs

Résumé

Ici, nous fabriquons une pipette en verre avec une double fonction : l’inhibition des structures cérébrales profondes par des micro-injections de médicaments et le suivi en temps réel de leurs effets grâce à des enregistrements électrophysiologiques simultanés.

Résumé

Nous décrivons ici une méthode pour la construction d'un usage unique "injectrode" en utilisant des pièces commercialement accessibles et abordables. Un système de palpage est développé qui permet l'injection d'un médicament lors de l'enregistrement de signaux électrophysiologiques à partir de la population neuronale affectée. Cette méthode offre une alternative simple et économique à des solutions commerciales. Une pipette de verre a été modifié en le combinant avec une aiguille hypodermique et un filament d'argent. Le injectrode est attaché à la pompe de microseringue commerciale pour la livraison de la drogue. Cela se traduit par une technique qui fournit en temps réel par réaction de la pharmacodynamique à unités multiples signaux extracellulaires provenant du site d'administration de médicament. Comme une preuve de concept, nous avons enregistré l'activité neuronale du colliculus supérieur provoquée par des éclairs de lumière chez les rats, en concomitance avec la livraison de médicaments à travers la injectrode. La capacité d'enregistrement d'injectrode permet la caractérisation fonctionnelle de la injsite de réflexion favorisant un contrôle précis sur la localisation de l'administration de médicaments. L'application de cette méthode étend également bien au-delà ce qui est démontré ici, comme le choix de la substance chimique chargé dans le injectrode est vaste, y compris le tracé des marqueurs pour les expériences anatomiques.

Introduction

L'inactivation des aires corticales et les noyaux sous-corticales est important dans l'étude des relations fonctionnelles entre les différentes structures cérébrales ^4.2. La littérature récente a employé des techniques cryogéniques chimique ou la perte de fonction d'étudier le rôle des structures cérébrales ^2,5. En ce qui concerne les micro-injections pharmacologiques, de petites quantités de médicaments peuvent être administrés dans une région du cerveau à une vitesse contrôlée, tout en minimisant les dommages collatéraux au tissu environnant de ^6,7. Cette technique peut être utilisée pour délivrer des agonistes spécifiqu....

Protocole

NOTE: Toutes les procédures ont été effectuées en conformité avec les directives du Conseil canadien pour la protection des animaux et de la commission d'examen d'éthique de l'Université de Montréal.

1. Assemblée de la pipette d'enregistrement injection

1. Tirer un capillaire en verre d'environ 7 cm de long (diamètre externe 1 mm) à l'aide d'un extracteur de pipette.
2. Casser l'embout du capillaire et vérifier l'ouverture sous un microscope optique. Assurez-vous que le diamètre interne est compris entre 30 um à 40 um.
3. Insérer un long fil d'argent de 7 cm dans le capillaire ....

Résultats

La construction de la injectrode est illustré sur la figure 1. Un fil d'argent (C) est introduit dans une pipette en verre (D) avec une portion pliée du fil et faisant saillie hors de l'ouverture. Une aiguille de 30 G (B) est fixé et scellé à l'ouverture de la pipette en verre avec de la colle. Après la pipette a été rempli avec la substance d'injection, un micro-seringue en verre (A) est fixé à l'aiguille. Il est important qu'il y ait une bonne étanchéité lorsque le micro sering.......

Discussion

Le protocole proposé a été conçu pour résoudre les défis découlant de méthodes d'inactivation réversible actuelles. Plus précisément, ce projet vise à affiner les méthodes utilisées pour les micro-injections de substances chimiques modulant l'activité neuronale, en particulier dans les structures profondes du cerveau. Un défi technique émergente de ce type de configuration est la nécessité pour les deux sondes pour être colocalisés dans le même espace restreint in vivo afin d'en tirer des enregistre.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pompe d’injection (UltraMicroPump III)	WPI	#UMP3
Console d’injection (Micro4 Controller)	WPI	#SYS-MICRO4
Seringue Hamilton	Hamliton	(80301) 701LT 10 µ ; L	Seringues SYR entre 5 et 10 &mu ; l
utilisé Adhésif plastique souple	Lepage	393915	La forme gel est plus facile à appliquer sur la tige du 30  ; G Aiguille hypodermique formant un joint étanche à l’état sec.
Pipettes en verre	WPI	#TW100F-4	Paroi mince, 1  ; mm OD, 0,75  ; mm ID avec pipettes à filament utilisées
720 Extracteur de pipette à aiguille	Kopf	720
Fil d’argent	A-M Systems, Inc.	782500	Nu 0,010 po