L’objectif de ce protocole est de décrire une approche chirurgicale pour fournir un accès direct au noyau cochléaire dorsal dans un modèle murin.
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Article de méthode
Visualisation directe de la Dorsale murin Cochlear Nucleus pour optogénétiques stimulation de la voie auditive
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Enquête sur l'utilisation du transfert de gène à médiation virale pour arrêter ou inverser la perte auditive a largement été reléguée au système auditif périphérique. Peu d'études ont examiné le transfert de gènes au système auditif central. Le noyau cochléaire dorsal (DCN) du tronc cérébral, qui contient des neurones de second ordre de la voie auditive, est un site potentiel de transfert de gènes. Dans ce protocole, une technique pour une exposition directe et maximale de la DCN murin par une approche de la fosse postérieure est démontrée. Cette approche permet une chirurgie aiguë ou la survie. Suite à la visualisation directe de la DCN, une multitude d'expériences sont possibles, y compris l'injection de opsins dans le noyau cochléaire et une stimulation ultérieure par une fibre optique couplée à un laser à lumière bleue. D'autres expériences de neurophysiologie, telles que la stimulation électrique et tracés d'injection de neurones sont également possibles. Le niveau de visualisation et la durée de la stimulation font réalisables cette approche applicable à un large éventail d'expériences.
Introduction
Le transfert de gènes médié par le virus pour inverser la perte auditive s’est largement concentré sur le système auditif périphérique. 1 En ciblant la cochlée, les chercheurs ont examiné une multitude de voies d’administration, y compris la mini-pompe osmotiqueinfusion 2, la Gelfoam®2 imbibée de complexe vectoriel-transgène ou l’éponge de gélatine3, la micro-injection directe4 ; de nombreux vecteurs de transfert de gènes, y compris les vecteurs viraux adéno-associés5,6, les vecteurs lentiviraux7 et les liposomes cationiques2 ; et la dissémination des vecteurs de transfert de gènes....
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Protocole
NOTE: Toutes les procédures expérimentales sont effectuées en conformité avec le soin et l'utilisation Comité pour les Animaux du Massachusetts Eye and Ear Infirmary et Harvard Medical School, qui suivent les lignes directrices de soins aux animaux nationaux, y compris la politique de santé publique service sur Humane soin et l'utilisation des animaux de laboratoire, le Guide ILAR, et la Loi sur la protection des animaux. Les procédures expérimentales énumérés ci-dessous l'exposition détaillée de la DCN gauche. Utilisez des instruments stériles tout en effectuant la chirurgie de survie.
1. Craniotomie primaire et Dorsale Cochlear Nucleus exposition ....
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Résultats
Partielle cérébelleuse aspiration démontre avoir accès à noyau cochléaire
Après la peau et le muscle recouvrant le crâne, les sites d'intérêt sont éliminés de la surface du crâne, comme les lignes de suture coronale et lamda, démontrer la localisation approximative de la craniotomie. Après craniotomie avec rongeurs, le cervelet est visualisée. Une aspiration soigneuse de la petite partie du cervelet montre la visualisation de la NC, qui peut alors être injecté (figure 1).......
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Discussion
Cet article décrit la technique de visualisation directe de la DCN dans le modèle murin pour la manipulation du système auditif central. L'approche décrite de la visualisation directe offre des avantages significatifs par rapport à la principale alternative, qui sont des approches stéréotaxiques. Principalement, la visualisation directe de la DCN permet de confirmation immédiate du site du tronc cérébral, alors que les approches stéréotaxiques ne offrent pas la visualisation directe. Dans les expériences qui nécessi.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs ne ont rien à divulguer.
Remerciements
Financement: Ce travail a été soutenu par une subvention de la Fondation Bertarelli (DJL), un MED-EL subvention (DJL) et les Instituts nationaux de la santé Subventions DC01089 (RCM).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Support stéréotaxique | Stoelting | 51500 | |
| Couverture homéothermique | Harvard | 507214 | |
| Lame de scalpel #11 | Outils chirurgicaux fins | 10011-00 | |
| Ciseaux à iris | Outils chirurgicaux fins | 14084-08 | |
| 5 Aspiration française | Symétrie Surgical | 2777914 | |
| Dental Points | Henry Schein | 100-8170 | |
| Pinceur osseux | Outils chirurgicaux fins | 16020-14 | |
| 10 & micro ; l Seringue | Hamilton Hamilton ; | 7633-01 | |
| Calibre 34, aiguille | Hamilton ; | ||
| Rongeurs | Outils Chirurgicaux Fins | 16021-14 |
Références
- Lalwani, A., Mhatre, A. Cochlear gene therapy. Ear Hear. 24 (4), 342-348 (2003).
- Lalwani, A., Jero, J., Mhatre, A. Current issues in cochlear gene transfer. Audiol Neurootol. 7 (3), 146-151 (2002).
- Jero, J., et al.
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Réimpressions et autorisations
