Contrast Enhanced Ultrasound imaging est un outil in vivo fiable pour quantifier le flux sanguin de la moelle épinière dans un modèle expérimental de lésion de la moelle épinière chez le rat. Cet article contient un protocole complet pour l’application de cette technique en association avec un modèle de contusion de lésion de la moelle épinière thoracique.
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Article de méthode
Contraste échographie amélioré pour l'évaluation de la moelle épinière flux sanguin dans la partie expérimentale Traumatisme médullaire
Dans cet article
Résumé
Résumé
Réduction du flux sanguin de la moelle épinière (SCBF) (c.-à-ischémie) joue un rôle clé dans une lésion traumatique de la moelle épinière (SCI) pathophysiologie et est donc une cible importante pour les thérapies neuroprotectrices. Bien que plusieurs techniques ont été décrites pour évaluer SCBF, ils ont tous des limitations importantes. Pour surmonter ce dernier, nous proposons l'utilisation du temps réel contraste amélioré échographie (CEU). Ici, nous décrivons l'application de cette technique dans un modèle de contusion de rat de SCI. Un cathéter jugulaire est d'abord implanté pour l'injection répétée d'agent de contraste, une solution de chlorure de sodium de l'hexafluorure de soufre microbulles encapsulées. La colonne vertébrale est alors stabilisé avec un 3D-cadre sur mesure et de la moelle épinière dure-mère est exposée par une laminectomie au THIX-ThXII. La sonde à ultrasons est ensuite positionné à la partie postérieure de la dure-mère (revêtue de gel d'ultrasons). Pour évaluer SCBF base, une seule injection intraveineuse (400 pi) de contrest agent est appliqué pour enregistrer son passage dans le système microvasculaire de la moelle épinière intacte. Un dispositif à chute de poids est ensuite utilisé pour générer un modèle de contusion expérimentale reproductible de SCI. agent de contraste est ré-injecté 15 minutes après la blessure pour évaluer les changements post-SCI SCBF. CEU permet en temps réel et in vivo évaluation des changements de SCBF suivante SCI. Chez l'animal indemne, échographie a montré le flux sanguin inégale le long de la moelle épinière intacte. En outre, 15 min post-SCI, il y avait ischémie critique au niveau de l'épicentre tandis SCBF resté conservé dans les zones les plus reculées intacte. Dans les régions voisines de l'épicentre (à la fois rostrale et caudale), SCBF a été significativement réduite. Cela correspond à la «zone de pénombre ischémique» décrit précédemment. Cet outil est d'un intérêt majeur pour évaluer les effets des thérapies visant à limiter l'ischémie et la nécrose tissulaire résultant à la suite de SCI.
Introduction
Lésion de la moelle épinière (SCI) est une maladie dévastatrice qui conduit à une altération significative du moteur, sensoriel et les fonctions autonomes. À ce jour, aucun traitement a démontré son efficacité chez les patients. Pour cette raison, il est important d'identifier de nouvelles techniques qui permettront d'améliorer l'évaluation des traitements potentiels et peut encore élucider blessures pathiophysiology 1.
SCI est divisé en deux phases successives, dénommé blessures primaires et secondaires. La blessure primaire correspond à l'insulte mécanique initiale. Alors que les groupes de blessures secondair....
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Protocole
NOTE: Les méthodes décrites dans ce manuscrit ont été approuvés par le comité de bioéthique de l'École de médecine Lariboisière, Paris, France (CEEALV / 2011-08-01).
1. Instrument Préparation
- Préparer et nettoyer les instruments suivants pour l'insertion du cathéter: micro-pinces, des ciseaux, des micro-micro-vasculaire, pince grands ciseaux, fils chirurgicaux (noir tressé de soie 4-0) et un cathéter 14 G. Hépariner le cathéter avec une solution d'héparine (5000 U / ml).
- Préparer et nettoyer les instruments suivants pour la laminectomie: grands ciseaux, scalpel et d'un coupe-os. Effectuer laminectomie ....
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Résultats
Avec le protocole décrit ci-dessus, il est possible de mapper le SCBF le long d'un segment de la moelle épinière sagittal longitudinal.
Dans la moelle épinière intacte, il semble y avoir des irrégularités de SCBF au sein du parenchyme (Figure 12). Ceci peut être expliqué par la répartition variable des artères radiculo-médullaire (RMA) d'un animal à l'autre. RMA se réfère à segmentaire artères qui atteignent l'artère spinale antérieure (ASA) et donc fournisse.......
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Discussion
Bien que nous avons décrit comment utiliser CEU chez un rat SCI modèle de contusion, ce protocole peut être modifié pour tenir d'autres objectifs expérimentaux ou modèles SCI. Nous avons choisi de mesurer SCBF à seulement deux points dans le temps (avant la lésion et 15 min post-SCI), mais le nombre de points dans le temps et le retard entre les mesures de SCBF peuvent être adaptés pour répondre aux besoins d'autres études. Par exemple, dans notre travail précédent 17, nous avons mesuré SCBF à cinq po.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun conflit d’intérêts financier concurrent. L’échographe a été gracieusement prêté par la société Toshiba France. La pompe Vueject a été gracieusement prêtée par la société Bracco France.
Remerciements
Nous remercions Stéphanie Gorgeard, Thierry Scheerlink (Toshiba France) et Christophe Lazare (Bracco France).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Fixateur externe Hoffman 3 | Stryker, Kalamazoo, USA | Système modulaire utilisé pour construire le cadre 3D sur mesure et le bras articulé tenant la sonde à ultrasons | |
| Toshiba Applio | Toshiba, Tokyo, Japon | Échographe | |
| Sonovue | Bracco, Milan, Italie | Agent de contraste : microbulles | |
| Pompe Vueject | Bracco, Milan, Italie | Pompe électrique pour perfusion de microbulles bolus | |
| Aquasonic Gel à ultrasons | Parker Laboratories, Fairfield, NJ, États-Unis | Gel à ultrasons utilisé pour transmettre les ondes ultrasonores | |
| Isovet | Piramal Healthcare, Mumbai, Inde | Isoflurane utilisé pour l’anesthésie | |
| Ultra Extend | Toshiba, Tokyo, Japon | Logiciel utilisé pour la quantification du flux | |
| sanguin de la moelle épinièreEnsemble de cinq mini-pinces Mastercraft, Produit #58-4788-6 | Canadian Tire, Toronto, Canada | Ensemble de pinces pour le bricolage |
Références
- Cadotte, D. W., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: a systematic review of current treatment options. Clin Orthop Relat Res. 469 (3), 732-741 (2011).
- Beattie, M. S., Farooqui, A. A., Bresnahan, J. C. Review of current evidence for apoptosis after spinal cord injury. <....
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Réimpressions et autorisations
