Des tests simples pour mesurer la sensibilité à l’éthanol et la tolérance rapide chez la drosophile facilitent l’utilisation de cet organisme modèle pour étudier ces comportements importants liés à l’éthanol. Ici, un test relativement simple et évolutif pour mesurer la sensibilité à l’éthanol et la tolérance rapide chez les mouches est décrit.
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Article de méthode
Un, test de comportement évolutives et économiques pour mesurer l'éthanol sédation sensibilité et la tolérance rapide dans
Dans cet article
Résumé
Résumé
trouble de consommation d'alcool (AUD) est un grave problème de santé. Malgré une forte composante héréditaire à AUD, quelques gènes ont été clairement mis en cause dans leur étiologie. La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est un modèle puissant pour explorer les mécanismes moléculaires sous-jacents génétique des comportements liés à l'alcool et détient donc une grande promesse pour l'identification et la compréhension de la fonction des gènes qui influencent AUD. L'utilisation du modèle de Drosophila pour ces types d'études dépend de la disponibilité de dosages qui mesurent de façon fiable les réponses comportementales de l'éthanol. Ce rapport décrit un dosage approprié pour évaluer la sensibilité de l'éthanol et de la tolérance rapide de mouches. la sensibilité à l'éthanol mesurée dans ce dosage est influencé par le volume et la concentration d'éthanol utilisé, une variété de manipulations génétiques signalés précédemment, et également la durée de vol sont logés sans nourriture immédiatement avant l'essai. En revanche, l'éthanol sensitivity mesurée dans ce dosage ne est pas affectée par la manipulation de la vigueur à la mouche, sexe du vol, et de suppléments de milieu de croissance avec des antibiotiques ou des levures vivantes. Trois méthodes différentes pour quantifier la sensibilité de l'éthanol sont décrits, tous conduisant à des résultats de sensibilité d'éthanol essentiellement indiscernables. La nature évolutive de ce test, combiné avec sa simplicité globale de set-up et relativement faible coût, le rendent approprié pour petits et grands analyse génétique à grande échelle de la sensibilité de l'éthanol et de la tolérance rapide chez la drosophile.
Introduction
trouble de consommation d'alcool (AUD) est un problème de santé dans le monde énorme (examiné en 1). Bien que les mécanismes favorisant le développement de AUD sont complexes, ces troubles ont une composante génétique importante (par exemple, 2). La grande héritabilité de l'AUD et les réponses comportementales conservés à l'éthanol dans de nombreuses espèces (3,4) examinés en ont généré un vif intérêt dans l'utilisation des organismes modèles génétiques pour enquêter sur l'implication de gènes spécifiques dans les comportements liés à l'éthanol vers une meilleure compréhension de la base moléculaire de....
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Protocole
1. Jour avant le test
- Recueillir les mouches dans des flacons de produits frais dans des groupes de 11 (même sexe) sous brève (1-5 min) CO 2.
- Permettre aux mouches de récupérer O / N dans des flacons de produits alimentaires dans un espace à environnement contrôlé (généralement 25 ° C, 60% d'humidité relative, 12 h cycle lumière / obscurité).
- Préparer la solution (s) de l'éthanol en diluant pur (100%) dans de l'éthanol purifié (≥18 MQ) de l'eau à la concentration finale (s) approprié à l'essai prévu. Laisser la solution (s) pour revenir à RT O / N.
Remarque: La dilution de l'éthanol est exotherm....
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Résultats
Les données brutes à partir de ce dosage de l'éthanol sédation est le nombre de mouches qui sont sédation en fonction de la vapeur d'éthanol temps d'exposition. Les données brutes sont converties au pourcentage vol actif en fonction du temps (données primaires, les figures 1A, B, D - F). Sensibilité à la sédation éthanol à partir des données primaires peut être quantifiée comme sédation Temps 50 (ST50), le temps nécessaire pour 50% des mouches pour devenir sous sédation ou A.......
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Discussion
Tests simples qui quantifient de manière reproductible phénotypes significatives sont d'une grande valeur pour l'analyse du comportement. Les travaux décrits ici traite de plusieurs aspects pratiques d'un test pour mesurer la sensibilité de l'éthanol de sédation et la tolérance rapide chez la drosophile. Bien que pas un objectif de ce travail, des analyses comportementales sont facilitées par le maintien de l'environnement et génétique constante de fond pour les sujets de test dans une étude.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ces études ont été soutenues par des subventions des National Institutes of Health, National Institute for Alcoholism and Alcohol Abuse à M.G. (P20AA017828, R01AA020634, P50 AA022537). Les auteurs remercient Jill Bettinger pour les discussions utiles et Jacqueline DeLoyht pour l’assistance technique.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| flacons alimentaires | VWR | 89092-772 | étroit |
| Flugs | Genesee/flystuff.com | 49-102 | étroit |
| en silicone | Fisher Scientific | 09-704-1l | #4 |
| éthanol | Pharmaco-Aaper | 111000200 | 200 proof |
Références
- Rehm, J., et al. Global burden of disease and injury and economic cost attributable to alcohol use and alcohol-use disorders. Lancet. 373, 2223-2233 (2009).
- Prescott, C. A., Kendler, K. S.
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Réimpressions et autorisations
