Mesurer le stress oxydatif Résistance<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; En 96 plaques de microtitration bien

Elite Possik; Arnim Pause

doi:10.3791/52746

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Article de méthode

Mesurer le stress oxydatif Résistance

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DOI :

10.3791/52746

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9 mai 2015

Elite Possik¹^,² , Arnim Pause¹^,²

¹Goodman Cancer Research Center, McGill University, ²Department of Biochemistry, McGill University

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Résumé

C. elegans est un organisme modèle attractif pour étudier les voies de transduction du signal impliquées dans la résistance au stress oxydatif. Nous fournissons ici un protocole pour mesurer la résistance au stress oxydatif des animaux C. elegans en phase liquide, en utilisant plusieurs agents oxydants dans des plaques à 96 puits.

Résumé

Le stress oxydatif, qui est le résultat d'un déséquilibre entre la production et la détoxication des espèces réactives de l'oxygène, est un contributeur majeur à des troubles humaines chroniques, y compris les maladies cardiovasculaires et neurodégénératives, le diabète, le vieillissement et le cancer. Par conséquent, il est important d'étudier le stress oxydatif, non seulement dans des systèmes cellulaires, mais aussi en utilisant des organismes entiers. C. elegans est un organisme modèle attractif pour étudier la génétique de l'oxydation des voies de transduction de signaux de stress, qui sont hautement évolutives conservées.

Ici, nous fournissons un protocole pour mesurer la résistance au stress oxydatif dans C. elegans dans un liquide. Brièvement réactifs, ROS induisant tels que le paraquat (PQ) et H ₂ O ₂ sont dissous dans du tampon M9, et des solutions sont aliquotées dans les puits d'une plaque de microtitrage à 96 puits. L4 synchronisée / jeune adulte C. elegans animaux sont transférés dans les puits (5-8 animaux / puits) et on mesure la survietoutes les heures jusqu'à la plupart des vers sont morts. Lors de l'exécution d'un essai de résistance au stress oxydatif en utilisant une faible concentration de facteurs de stress dans les plaques, le vieillissement pourrait influencer le comportement des animaux sur le stress oxydatif, qui pourraient conduire à une interprétation erronée des données. Cependant, dans l'essai décrit ci-après, ce problème est peu probable étant donné que seules L4 / jeunes animaux adultes sont utilisés. En outre, ce protocole est peu coûteux et les résultats sont obtenus en une seule journée, ce qui rend cette technique attrayante pour les écrans génétiques. Dans l'ensemble, cela va aider à comprendre oxydatives voies de signalisation du stress de transduction, qui pourraient se traduire en une meilleure caractérisation des troubles d'oxydation humaines stress associé.

Introduction

Chez les eucaryotes, la phosphorylation oxydative de prendre place dans la chaîne de transport des électrons des mitochondries est le principal moteur de la production d'énergie sous forme d'ATP. Espèces réactives de l'oxygène (ROS) sont un sous-produit naturel de ce processus. En dépit de leur rôle important en tant que molécules de signalisation, ROS excessive peut conduire à des lésions de l'ADN, des protéines carbonylation, et l'oxydation des lipides. Un déséquilibre entre la production de ROS et de désintoxication provoque le stress oxydatif, qui conduit à l'épuisement de l'énergie, des dommages cellulaires, et déclenche la mort cellu....