Les injections intramusculaires le long des plaques motrices de fin: une approche minimalement invasive à la navette Tracers Directement dans motoneurones

Résumé

L’efficacité de l’absorption intramusculaire et du transport rétrograde des molécules vers les motoneurones correspondants dépend de l’emplacement des sites d’injection par rapport aux plaques d’extrémité motrices (MEP). Ici, nous décrivons comment localiser les MEP sur les muscles squelettiques afin d’optimiser le transport rétrograde des traceurs dans les motoneurones.

Résumé

Les maladies affectant l'intégrité des neurones moteurs de la moelle épinière sont parmi les troubles neurologiques les plus débilitantes. Au cours des dernières décennies, le développement de plusieurs modèles animaux de ces maladies neuromusculaires a fourni à la communauté scientifique avec différents scénarios thérapeutiques visant à retarder ou inverser la progression de ces conditions. En tirant parti de la machinerie rétrograde de neurones, une de ces approches a été de cibler les muscles squelettiques afin de gènes thérapeutiques de la navette dans les neurones moteurs de la moelle épinière correspondant. Même si une fois prometteur, le succès de l'approche de livraison tels génique a été entravée par le nombre de sous-optimale des neurones moteurs transduites il a montré jusqu'ici de céder. plaques d'extrémité du moteur (MEPs) sont des régions très spécialisées sur les muscles squelettiques qui sont en contact synaptique direct à la moelle épinière α neurones moteurs. À cet égard, il est important de noter que, jusqu'à présent, les efforts de manière rétrogradetransférer des gènes dans les neurones moteurs ont été faites sans référence à l'emplacement de la région MEP dans les muscles ciblés. Ici, nous décrivons un protocole simple 1) pour révéler l'emplacement exact des députés sur la surface des muscles squelettiques et 2) d'utiliser cette information pour guider la prestation intramusculaire et transport rétrograde optimale ultérieure des traceurs rétrogrades dans les neurones moteurs. Nous espérons que d'utiliser les résultats de ces expériences de traçage dans d'autres études dans l'enquête sur le transport rétrograde de gènes thérapeutiques aux neurones moteurs de la moelle épinière à travers le ciblage des députés.

Introduction

La perte de contrôle du mouvement volontaire qui résulte de troubles neurologiques comme la maladie du motoneurone et spinal- ainsi que l'atrophie musculaire de Duchenne est une maladie débilitante qui a un impact élevée et durable sur la vie quotidienne des personnes touchées. Au cours de la dernière décennie, les efforts de recherche visant à arrêter ou au moins retarder les effets délétères de ces maladies neuromusculaires a été une priorité pour de nombreux cliniciens et les scientifiques du monde entier. À cet égard, la dernière génération de modèles animaux qui imitent ces maladies neuromusculaires a joué un rôle dans l'obtention de connaissances fondam....

Protocole

Toutes les procédures expérimentales décrites ici respectées les soins et du Comité d'éthique animale de l'UNSW Australie et ont été effectuées en conformité avec le Medical Research Council de l'Australie règlements pour l'expérimentation animale Santé nationale et du. Toutes les procédures décrites dans ce protocole doivent être effectués en conformité avec l'exigence de la commission de protection des animaux et de l'éthique pertinents.

1. acétylcholinestérase histochimique coloration

1. Préparer le mélange de réaction de l'acétylcholinestérase
   1. Ajouter 290 mg de iodure d'acétylthiocholin....

Résultats

Acetylcholinesterase coloration histochimique révèle l'emplacement des plaques d'extrémité du moteur sur toute la largeur des muscles. La figure 1 illustre les résultats d'une telle coloration effectuée sur un ensemble des membres antérieurs du rat. Il est recommandé d'optimiser la concentration de la solution de sulfure d'ammonium (par ex., De 5 à 7% au lieu de 10%) ainsi que le moment où le spécimen est immergé dans la solution si la coloration de fond non-spécifique sur l.......

Discussion

Ciblage intramusculaire et le transfert rétrograde ultérieure de transgènes thérapeutiques pour les motoneurones α correspondant pour le traitement expérimental de l'état neuromusculaire est pas une nouvelle stratégie. Par exemple, ce mode de livraison a été utilisée pour retarder la dégénérescence neuromusculaire à différents stades de la progression de la SLA chez les souris et les rats SOD1 ^1,9-12 ainsi que chez les souris avec ¹³ SMA. Bien que prometteur, l'efficacité de ces scénarios d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fluorochrome	fluoro-or, LLC	Aucun	dilué à 5 %
Micropipets PCR Drummond 1-10 & micro ; l	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	accompagné de pistons
Acétylthiocholine Iodure	Sigma Life Science	A5751-25G
Sulfate de cuivre(II) Anhydre	Sigma-Aldrich	61230-500G-F
Tissue-Tek O.C.T Compound	Sakura Finetek	25608-930
Glycine	Ajax Finechem	1083-500G
Dextran, tétraméthylrhodamine et biotine	Life Technologies	D-3312	Diliuté dans de l’eau distillée
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 mg/g Isoflurane inhalation vapeur
Autoclip 9 mm Wound Clips	Texas Scientific Instruments, LLC	205016
Lethabarb Enthanasia Injection	Virbac (Australia) Pty Ltd.
LETHA450 Solution de formaldéhyde	Ajax Finechem	A809-2.5L PL
SuperFrost Plus lames de verre	Menzel-Glaser	J1800AMNZ
Sulfure d’ammonium	Sigma-Aldrich	A1952	Dilué à 10
%Marcain Spinal 0,5 % (chlorhydrate de bupivacaïne)	Astrazenca		Dilué à 0,25 %