L'isolement et la propagation des cellules tumorales circulantes d'un cancer Modèle Souris

Résumé

Il a été démontré que la classe

Les cellules tumorales circulantes (CTC) jouent un rôle important dans les métastases tumorales. Ici, une méthode d’isolement et de propagation de CTC à partir du sang total d’un modèle de tumeur de souris syngénique de métastases de carcinome hépatocellulaire (CHC) est décrite.

Résumé

Les métastases cancéreuses sont la principale cause de décès associés au cancer. Des études récentes ont montré que les cellules tumorales circulantes (CTC) sont importantes dans les métastases cancéreuses. En effet, le nombre de CTC est corrélé à la taille de la tumeur. Ici, une description détaillée est fournie d’une méthodologie d’isolement et de propagation des CTC à partir d’un modèle murin syngénique de carcinome hépatocellulaire (CHC) qui permet une analyse en aval des mécanismes moléculaires potentiellement importants des métastases tumorales d’organes solides. Cette méthode est efficace et reproductible. Il s’agit d’une technique non invasive qui, par conséquent, a le potentiel de remplacer la biopsie invasive de tissus humains qui peut être associée à des complications. Par conséquent, la méthode décrite ici permet d’isoler et de propager les CTC à partir d’échantillons de sang total afin qu’ils puissent être examinés et caractérisés. Cela a un potentiel d’adaptation future pour des applications cliniques telles que le diagnostic et la thérapie ciblée personnalisée.

Introduction

La communauté de recherche sur le cancer connaît l’existence des cellules tumorales circulantes (CTC) depuis qu’elle a été observée pour la première fois par Thomas Ashworth en 1869¹. Depuis lors, il a été démontré que les CTC sont importants dans les métastases tumorales et la progression de la maladie^2-5. Aujourd’hui, les tumeurs solides sont une cause majeure de morbidité et de mortalité dans le monde. Les CTC sont des cellules rares qui proviennent de tumeurs primaires et voyagent dans la circulation sanguine vers différents organes, dont seule une petite fraction se développe finalement en métastases^{2 à 5}. Notamment, il existe une....

Protocole

Déclaration éthique: Toutes les études sur les animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de protection des animaux et l'utilisation (IACUC) du Hunter College de la City University de New York.

1. Procédures pré-expérimentation

1. À l'arrivée à l'animalerie, Maison initialement 3 souris BALB / c à une cage avec une literie de haut et de copeaux de bois filtré. Veiller à ce que les souris ont un accès libre à la nourriture, nourriture pour rongeurs Purina, et de l'eau. Literie et la nourriture doivent être changés deux fois par semaine, alors que les cages doivent être nettoyés une fois par semaine.

Résultats

La méthodologie décrite ici a montré que les CTC peuvent être isolés. Les souris ont été euthanasiés au expérimentale point final. Le processus impliqué asphyxie du dioxyde de carbone, l'exsanguination intra-cardiaque et dislocation cervicale. Un schéma d'étapes de cette intervention sont illustrées sur la figure 2. Des échantillons de sang total prélevé par exsanguination intracardiaque ont été traitées selon le protocole décrit ci-dessus. Après quoi, la centrifugation a été ut.......

Discussion

Dans cette étude, nous avons décrit comment isoler et propager des CTC à partir du sang total d’une souris syngénique atteinte de CHC. L’objectif de ce travail est d’enrichir les études en cours sur les mécanismes des métastases cancéreuses.

Un facteur qui contribue au mauvais pronostic de nombreux cancers est le manque de détection précoce et la dissémination généralisée de la tumeur maligne³. Les CTC proviennent de cancers primitifs et se propagent par la circulation sanguine ver.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Héparine Sel de sodium 1 g	VWR	89508-852
BTX Tube Micro 1,5 ml Transparent NS	VWR	89511-254	1,5 ml sans pyrogène Eppendorf Tubes
Aiguille Stérile Disp BD 25 G x 1 po	VWR	BD305125	25 G
Aiguille Slp Tip SRNG 1 ml 200 chacun par paquet	VWR	BD309659	1 ml Embout de seringue
Seringue 1 ml leur lok Pk 100	VWR	BD309628	Seringue de 1 ml
VWR Forceps Tissue 6	VWR	82027-446	Pince
Cyromold intrm 15 x 15 x 5 mm PK 100	VWR	25608-924	Cyromold
Cryo-oct compund 4 oz	VWR	25608-930	Oct compound
VWR Slide sprfrst 25 x 75 mm PK72	VWR	48311-703	Slides
VWR Cover Glass #2 22 x 50 mm	VWR	48-382-128	Verre de couverture
VWR Slide Box True North Fm Pu	VWR	89140-278	Slide Box
Super HT PAP Pen	VWR	89427-058	Stylo PAP
Eau sans RNASe et DNAse 2 L	VWR	101454-204	d’eau sans nucléase
Tris Ultra Pure Grade 500 g	VWR	97061-796	Tampon Tris
Chlorure d’ammonium ACS Grade 2, 5 kg	VWR	97062-048	Tampon au chlorure d’ammonium
Falcon Boîte de culture tissulaire 60 x 15 mm Style polystyrène	VWR	353002	Boîte de culture tissulaire
Clorox Eau de Javel, régulière	VWR	89501-620	Clorox Bleach
PBS, 1x (solution saline tamponnée au phosphate) sans calcium ni magnésium (500 ml)	Thermo Fischer Scientific	21-040-CV	PBS, 1x
DMEM, 1x  ; avec 4,5 g/L de glucose & L-glutamine sans pyruvate de sodium	Thermo Fischer Scientific	10-017-CV	DMEM 1x milieu pour cellules BNL 1ME A.7R.1
Sérum fœtal bovin	Thermo Fischer Scientific	35-010-CV	FBS
Pénicilline Streptomycine Solution, 100x	Thermo Fischer Scientific	30-002-Cl	Pénicilline Streptomycine
Sorvall Biofuge pico	Thermo Fischer Scientific	75002411	Centrifugeuse à 13 000 tr/min

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