Repérer les tissus correcte à chaque fois dans les blocs multi-tissus

Résumé

Le but de l'échantillon Orientation Tag (spot) est de fonctionner comme un outil d'orientation pour aider à l'identification de tissus individu dans des blocs de paraffine multi-tissus. Ces protocoles démontrent comment il est construit à partir de matériaux facilement communes d'histologie à faible coût et sert de repère visuel fiable dans des blocs de paraffine et des sections.

Résumé

Blocs de paraffine multi-tissus fournissent une analyse à haut débit avec une efficacité accrue, l'uniformité expérimental, et réduit le temps et le coût. microarrays de tissu forment la majorité des blocs de paraffine multi-tissus, mais de plus en plus, les chercheurs utilisent des blocs non-revêtu contenant de grandes tissus provenant de plusieurs individus qui peuvent fournir de nombreux avantages de matrices tissulaires sans investissement important dans la planification et de l'équipement. Un élément essentiel d'une analyse multi-tissulaire est la méthode d'orientation permettant d'identifier chaque individu tissu. Bien que les méthodes existent pour maintenir l'orientation et l'identification des tissus dans des blocs multi-tissus appropriée, la plupart ne sont pas bien adaptés à des blocs non-revêtu, peuvent consommer de l'espace précieux dans un tableau et / ou sont difficiles à produire en laboratoire d'histologie standard. Le spécimen Orientation Tag (spot) est un outil d'orientation simple et peu coûteuse qui est clairement visible dans des blocs de paraffine et toutes les sections de tissus for l'identification de l'échantillon fiable dans les présentations disposés et non disposés. La tache présente des avantages par rapport aux méthodes existantes d'orientation pour les blocs non-revêtu car il ne nécessite pas de modification directe au tissu et permet une certaine souplesse dans l'arrangement des morceaux de tissu.

Introduction

La possibilité d'intégrer des échantillons de tissus provenant de plusieurs individus dans un seul bloc de paraffine permet une comparaison facile side-by-side entre les traitements et les individus, élimine la variabilité entre les diapositives, et réduit le coût et la charge de travail de la coupe et coloration de spécimens. Ces blocs multi-tissus sont généralement produites soit comme matrices tissulaires (TMA) ou des blocs de paraffine contenant des tissus à partir de plusieurs individus dans une disposition non-tableau. Maintien de l'identité de l'échantillon est critique pour le succès de toute analyse multi-tissu. Les chercheurs ont été en utilisan....

Protocole

1. Construction de la tache

1. Ajouter 50 mg de sérum-albumine bovine (BSA) à 1 ml tissu colorant de marquage dans un tube conique de 15 ml ou 2 ml tube de microcentrifugation et vortex pendant 1 minute ou jusqu'à dissolution complète.
   Remarque: Pour ce protocole, utilisez biochimique année BSA. Alors que d'autres grades et des puretés ont pas été testés, il est prévu que de qualité et de pureté ne seraient pas avoir un impact significatif sur le succès de la tache.
2. Heat 9 ml hydroxyéthyle gel de traitement agarose dans un tube de 15 ml conique dans un micro-ondes à puissance de 30% pour les incréments de 10 secondes jusqu'à ce qu....

Résultats

Le spot apparaît comme un tour, point de couleur vive dans le bloc de paraffine (Figure 1A et 2D), dans toutes les sections de paraffine, et reste sur la lame de verre à travers la procédure H & E ou la coloration IHC (figures 1B - 1D et 2D). Cette évidentes aides de repère visuels deux l'histotechnician et chercheur à identifier chaque pièce de tissu individuelle et simplifie la communication comme l'histotechnician peuvent utilise.......

Discussion

Préparation réussie et l'utilisation des taches nécessite le respect attentif à quelques étapes techniques. Fusion de l'agarose d'hydroxyéthyle doit se faire lentement et à basse température. Melting rapidement à haute température peut entraîner une certaine dégradation de la gélose pour moins de résultats optimaux. Lors de la coupe des bouchons de colorant chargées en morceaux destinés à la transformation, en sorte que l'épaisseur de chaque pièce est supérieure à 4,5 mm et ne dépasse pas 7 mm. Les extré.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Gel de traitement d’échantillons Histogel	Thermo Scientific	HG-4000-012	http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html
Colorant de marquage tissulaire	Triangle Biomedical Sciences, Inc.	TMD-5	: Tout colorant de marquage tissulaire serait probablement suffisant.
Arraymold Kit A 2 mm (60 noyau)	Arraymold	20015A	N’importe quel arrayer manuel de tissus fonctionnerait de la même manière.