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Article de méthode

La thérapie photodynamique avec Blended polymère conducteur / Fullerene nanoparticules photosensibilisants

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⸱

DOI :

10.3791/53038

⸱

28 octobre 2015

 , 
1NanoScience Technology Center, University of Central Florida, 2Department of Chemistry, University of Central Florida, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Central Florida, 4CREOL, The College of Optics and Photonics, University of Central Florida

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une méthode de fabrication de nanoparticules de polymères conducteurs mélangées à du fullerène. Ces nanoparticules ont été étudiées pour leur utilisation potentielle en tant que photosensibilisateurs de nouvelle génération pour la thérapie photodynamique (PDT).

Résumé

Dans cet article, une méthode de fabrication et d’évaluation in vitro reproductible de nanoparticules de polymères conducteurs mélangées à du fullerène en tant que photosensibilisants de nouvelle génération pour la thérapie photodynamique (PDT) est présentée. Les nanoparticules sont formées par interaction hydrophobe du polymère semi-conducteur MEH-PPV (poly[2-méthoxy-5-(2-éthylhexyloxy)-1,4-phénylènevinylène]) avec le fullerène PCBM (ester méthylique de l’acide phényl-C 61-butyrique) en présence d’un solvant non compatible. MEH-PPV a un coefficient d’extinction élevé qui conduit à des taux élevés de formation de triplets et à un transfert efficace de charge et d’énergie vers le PCBM à fullerène. Ces derniers procédés améliorent l’efficacité du système PDT grâce à la formation de triplets et de radicaux assistés par le fullerène, et à la désactivation ultrarapide de MEH-PPV excité. Les résultats rapportés ici montrent que ce système de sensibilisation PDT nanoparticulaire est très efficace et présente une spécificité inattendue pour les lignées cellulaires cancéreuses.

Introduction

En thérapie photodynamique (PDT) photosensibilisants sont administrés à un tissu cible, et lors de l'exposition à la lumière du photosensibilisant génère Reactive Oxygen Species (ROS). ROS espèces tels que l'oxygène singlet et superoxyde peuvent induire un stress oxydatif et les dommages structurels à la suite de cellules et de tissus 1-4. En raison de sa facilité d'application de cette méthode a été activement étudiée et des essais cliniques ont eu lieu de 5,6. Cependant, des problèmes importants tels que la toxicité dans l'obscurité des sensibilisateurs, la sensibilité du patient à la lumière (en raison de la distribution non-sélective de l'agent de sensibilisation), et le caractère hydrophobe des sensibilisateurs (ce qui conduit à une biodisponibilité réduite et le potentiel de toxicité aiguë) restent.

Nous rapportons ici un procédé pour la fabrication et l'évaluation in vitro de la conduite nanoparticules de polymère mélangé avec les photosensibilisateurs fullerène en tant que nouvelle génération de PDT. Les nanoparticules sont formées par auto-agrégation desle polymère semi-conductrice MEH-PPV (poly [2-méthoxy-5- (2-éthylhexyloxy) -1,4-phénylènevinylène]) avec le PCBM de fullerène (C 61 phényl-butyrique ester méthylique d'acide) lorsque ces matériaux dissous dans un compatible solvant sont rapidement injectés dans un solvant non compatible (figure 1A). Le choix de MEH-PPV que le polymère hôte est motivé par son coefficient d'extinction élevé qui conduit à des taux élevés de formation de triplet, et à la fois la charge et le transfert d'énergie efficace et ultrarapide pour le fullerène PCBM 7. Ces propriétés sont idéales pour la sensibilisation de l'oxygène singulet et la formation de superoxyde dans la PDT.

Fullerène a en fait été appliquée dans la PDT dans la forme moléculaire et nanoparticule 8-13. Cependant, la cytotoxicité sévère a entravé le développement 12. Ici, nous montrons que l'encapsulation du fullerène dans une matrice hôte de MEH-PPV donné composites nanoparticules MEH-PPV / PCBM résultats dans un matériau sensibiliser PDT que jeest pas cytotoxique intrinsèque, montre spécificité envers les cellules cancéreuses en raison de la taille des nanoparticules et de la charge de surface, et les rendements de traitement PDT très efficace à des doses de faible luminosité due aux propriétés photophysiques susmentionnés.

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Protocole

1. Lignes de culture de cellules

  1. (Cellules humaines ovariennes tumorales) en maintenant les flacons de cryogène dans l'eau chaude pour les moins de 2 min Thaw TE 71 (cellules épithéliales thymiques Souris), MDA-MB-231 (cellules de cancer du sein humain), de A549 (cellules de cancer du poumon humain) et OVCAR3 . Ajouter 10 ml de milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS à chaque lignée cellulaire et centrifuger pendant 6 min à 106 x g.
  2. Aspirer la suspension et ajouter des médias 3ml au culot. Mélanger les cellules correctement par pipetage à plusieurs reprises. Ajouter cette solution à la cellule préchauffé 7 ml de milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS dans des flacons T75 et maintenir des flacons en atmosphère humidifiée de 95% d'air / 5% de CO2 à 37 ° C. Étiqueter ce flacon comme Passage 0.
  3. Lorsque la confluence des cellules atteint 80%, de récolter les cellules par incubation avec de la trypsine 0,05% pendant 10 min. Neutraliser la trypsine en ajoutant quantité égale de médias. Centrifugeuse cette solution pendant 6 minutes à 106 x g. Retirer la suspension et ajouter 3 ml de milieu frais à elle. Mélanger well et transférer petite quantité (100 ul) dans un flacon de culture contenant 7 ml de milieu. Incuber le flacon de culture dans un incubateur. Etiqueter le flacon comme Passage 1.
  4. Culture des lignées cellulaires jusqu'au passage 11 ou 12.

2. Fabrication de nanoparticules

  1. Préparation de ~ 10 -6 M (ajusté) non dilué solution stock MEH-PPV
    1. Dans un flacon de 1 mg ajouter Poly [2-méthoxy-5- (2-éthylhexyloxy) -1,4-phénylènevinylène] (MEH-PPV) ayant une masse moléculaire (moyenne en nombre Mn) 150,000-250,000 g / mol et 3 ml de tétrahydrofuranne (THF) . On agite le mélange pendant 2 heures tout en chauffant à 80 ° C sur une plaque chaude.
    2. Filtrer la solution ci-dessus dans un nouveau flacon en utilisant un filtre à seringue de 0,2 pm. Étiqueter cette solution comme «MEH-PPV solution stock non dilué. Cette solution sera impliqué dans la préparation de nanoparticules après un réglage fin de la concentration comme décrit dans les étapes 2.1.3 et 2.1.4.
    3. Ajouter 50 pi de la solution stock de MEH-PPV non dilué dans 3 ml de THF. Étiqueter cette solution comme «stock solution diluée MEH-PPV. Transférer dans une cuvette en quartz de 1 cm et mesurer l'absorbance à 495 nm par spectroscopie UV-vis.
    4. Si l'absorbance de la solution stock de MEH-PPV diluée est supérieure à 0,17, diluer la solution stock de MEH-PPV non dilué en ajoutant plus de THF 1 ml à la fois, et répétez l'étape 2.1.3 jusqu'à ce que l'absorbance mesurée à 495 nm est dans le aller 0,13 à 0,17.
    5. Calculer la molarité de la solution stock de MEH-PPV diluée en utilisant la loi de Beer-Lambert, comme indiqué ci-dessous. Ici 0,15 absorbance est utilisée, par exemple, pour le reste du protocole (par exemple., D'ajuster tous les calculs suivants sur la base de l'absorbance observée), le coefficient d'extinction MEH-PPV utilisé est de 10 7 M -1 cm -1 et la longueur de chemin d'accès utilisé est 1 cm.
      A = ε xbxc (équation 1)
      (ε - le coefficient d'extinction molaire, A - absorbance, b - longueur du trajet, c - concentration de la solution)
      0.15 = 10 7 M -1 cm -1 x 1 cm xc (équation 2)
      c = 1,5 x 10 -8 M (équation 3)
      Utilisez cette concentration pour trouver la concentration de la solution mère de MEH-PPV non dilué comme suit:
      M 1 V 1 = V 2 M 2 (équation 4)
      0,15 x 10 -7 M x M = 3050 pi 2 x 50 pi (équation 5)
      M 2 = 9,15 x 10 -7 M (équation 6)
      Ceci est la concentration de la 'MEH-PPV solution stock non dilué ajusté ».
  2. Calcul de masse de MEH-PPV dans la solution stock de MEH-PPV non dilué rajusté
    1. Calculer la masse de MEH-PPV dans 1 ml de la solution mère non dilué ajusté comme indiqué ci-dessous en utilisant la molarité obtenue dans la section 2.1.4 et le poids moléculaire (Mw) de MEH-PPV, qui est de 10 6 g / mol.
      M = n / V (n -. Pas de moles, V - le volume en L) (équation 7)
      Ainsi, la masse du MEH-PPV dans 1 ml de und ajustésolution stock iluted est 9,15 x 10 -4 g.
  3. Alliant PCBM dans MEH-PPV
    1. Calculer la masse de Phenyl-C 61 butyrique ester méthylique d'acide (PCBM) pour être ajouté dans la solution mère de MEH-PPV de faire dopé solution MEH-PPV 50% en poids PCBM, où 50% PCBM est définie par rapport à la masse de MEH-PPV (par exemple, la moitié de la masse de MEH-PPV). En utilisant le poids de MEH-PPV obtenue dans la section 2.2.
      Messe de PCBM / 9,15 x 10 -4 g de MEH-PPV x 100% = 50% en poids PCBM (équation 8)
      Messe de PCBM = 4,57 x 10 -4 g (équation 9)
    2. Peser 1 mg PCBM dans une fiole et ajouter 500 ul de THF. Calculer la concentration de cette solution en PCBM en utilisant le poids moléculaire du PCBM comme 910,88 g / mol
      Molarité de solution de PCBM = 0,001 g / (910,88 g / mol * 500 pi) (équation 10)
      Molarité de la solution de PCBM = 2,19 x 10 -9 mol / ul (équation 11)
    3. Calculer le volume de solution de PCBM nécessaire d'ajouter à la ME non dilué ajustéSolution H-PPV de stock pour obtenir le PCBM dopé solution à 50% en poids de MEH-PPV dans le THF en utilisant la molarité calculé à l'étape 2.3.2
      4,57 x 10 -4 g du PCBM x 1 mol / 1 910,88 gx ul / 2,19 x 10 -9 mol = 229 ul (équation 12)
      Ajouter 229 pi de la solution de PCBM dans 1 ml de solution stock ajusté MEH-PPV non dilué et bien mélanger.
  4. Préparation de nanoparticules par un procédé de reprécipitation
    1. Transférer 1 ml de la solution MEH-PPV / PCBM mélangé dans la seringue de 1 ml avec l'aiguille attachée à elle.
    2. Injecter rapidement 1 ml de la solution MEH-PPV / PCBM mélangé dans 4 ml d'eau DI agitation à 1200 rpm. Arrêtez de remuer immédiatement après l'injection. Utilisez ces nanoparticules sans autre traitement.

3. Incubation de lignées cellulaires avec des nanoparticules pour l'imagerie

NOTE: Toutes les expériences d'imagerie ont été achevés en boîtes de Pétri de 35 mm

  1. L'absorption de nanoparticles dans des lignées cellulaires
    1. Des lignées cellulaires de culture jusqu'à la 12 ème passage. À la 12 e des cellules de culture de passage à 35 mm boîtes de Pétri. Ajuster la concentration de cellules ajoutées aux 35 mm boîtes de Pétri de telle sorte qu'après 24 h les cellules sont 40% de confluence.
    2. A ce stade, retirer le support du DMEM supplémenté avec 10% de FBS à partir des boîtes de Pétri, laver les cellules deux fois avec du DPBS 1x, et ajouter 100 ul de la suspension de nanoparticules dans 2 ml de DMEM pour les boîtes de Pétri.
    3. Après 24 heures enlever le DMEM / nanoparticules suspension des boîtes de Pétri et laver les cellules avec 1x DPBS 3 fois. Ensuite, fixer les cellules par incubation avec du paraformaldehyde à 4% pendant 10 min. Laver deux fois avec du DPBS. Colorer les cellules avec 300 nM DAPI par incubation avec le colorant pendant 2 min. Laver deux fois avec du DPBS. Puis maintenir les cellules dans du DPBS pour l'imagerie.
  2. Détection de ROS
    1. A549 de la Culture et des lignées cellulaires OVCAR3 dans des boîtes de Pétri, 6 pour la lignée cellulaire, comme expliqué dans la section 3.1.1. Etiqueter leDes boîtes de Pétri comme indiqué dans le Tableau 1.
    2. Ajouter 100 ul de la suspension de nanoparticules dans 2 ml de DMEM à trois des boîtes de Pétri comme indiqué dans le tableau 1 et incuber pendant 24 heures. Pour les boîtes de Pétri qui recevront des doses de lumière, laver les cellules après 24 h et les cellules en suspension dans HBSS (solution saline équilibrée de Hank) Dye médias libres.
    3. Réchauffez la lampe du simulateur solaire pour 15 min. Placez filtre UV en avant de la lampe à filtrer les rayons UV. Calibrer la lampe avec une cellule solaire de référence en ajustant la puissance de la lampe pour obtenir 0,5 soleil (50 mW / cm 2) intensité à la surface de la boîte de Pétri. Dans cette configuration particulière que la condition a été réalisée avec 218 W de puissance fournie à la lampe.
    4. Placer les boîtes de Pétri sous la lampe (couvercle ouvert) pendant 60 min, ce qui résulte en un dosage de lumière 180 J / cm 2 tel que représenté dans les calculs ci-dessous:
      50 mW / cm 2 x 3.600 sec / 1,000 = 180 J / cm 2
    5. Retirer HBSS sans lavage et ajouter en outre de 2 ml de milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS pour les boîtes de Pétri. Incuber les cellules pendant encore 2 heures.
    6. Pour le contrôle positif incuber les cellules avec 100 pM de peroxyde d'hydrogène (H 2 O 2) pendant 30 min.
    7. Colorer les cellules dans toutes les boîtes de Pétri avec une concentration finale de 5 uM du réactif de détection ROS en incubant les cellules avec le colorant pendant 30 min à 37 ° C.
    8. Fixer les cellules par incubation avec du paraformaldehyde à 4% pendant 10 min. Laver deux fois avec du DPBS. Colorer les cellules avec 300 nM DAPI par incubation avec le colorant pendant 2 min. Laver deux fois avec du DPBS. Puis maintenir les cellules dans du DPBS pour l'imagerie.
  3. Apoptose et la nécrose par PI et l'annexine V FITC
    1. Culture de chaque lignée cellulaire dans 5 boîtes de Pétri. Trois de ces boîtes de Petri aura pour l'expérience 2, tandis que les boîtes de Pétri restants seront échantillons témoins. Incuber les 3 boîtes de Pétri pour expérimenter avec des nanoparticules que l'eXplained à la section 3.1.2. Les échantillons de contrôle ne sont pas incubées avec des nanoparticules.
    2. Après 24 heures d'incubation suivre l'étape 3.2.3.
    3. Placez les 3 boîtes de Pétri expérimentales sous la lampe (couvercle ouvert) et supprimer l'un à 20 min, l'un à 40 min et l'autre à 60 min. Cela donne trois échantillons qui ont été exposés à des doses de lumière de 60, 120 et 180 J / cm 2, respectivement (calcul à la section 3.2.4). Ensuite, administrer un 180 J / cm 2 dosage de la lumière à l'un des plats contrôle de Pétri. Ceci est la dose de lumière de contrôle appliqué en l'absence de nanoparticules. Ne pas appliquer la dose de lumière à l'échantillon de contrôle restant (pas de nanoparticules et aucune dose de lumière appliquée).
    4. Remplacez le HBSS avec les médias DMEM supplémenté avec 10% de FBS et garder les boîtes de Pétri dans l'incubateur pendant 4 heures.
    5. Colorer les cellules dans le dispositif expérimental et les boîtes de Pétri de contrôle avec 20 pi d'annexine V FITC en incubant les cellules avec le colorant pendant 15 min. Laver deux fois avec du DPBS. Colorer le caunes avec 300 nM DAPI ainsi que 300 nM PI (iodure de propidium) par incubation avec les colorants pour 2 min. Laver deux fois avec du DPBS. Puis maintenir les cellules dans du DPBS pour l'imagerie.

4. La cytotoxicité intrinsèque de nanoparticules

  1. Le comptage des cellules et mise en culture dans des plaques à 96 puits
    1. Récolter les cellules provenant des flacons de culture en supprimant médias et lavage des cellules deux fois avec du DPBS puis par incubation des cellules avec de la trypsine 0,05% pendant 10 min. Ajouter 2 ml de milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS à la solution de cellules résultante. Mélanger la solution appropriée pour séparer les amas de cellules en maillots.
    2. Prendre 100 ul de la suspension de cellules et ajouter 900 ul de milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS. Bien mélanger. Placez 10 pi de cette suspension sur un hémocytomètre. Compter les cellules en utilisant un hémocytomètre et la régler la concentration de la suspension de cellules dans 4.1.1 à 5 x 10 4 cellules / ml.
    3. Prenez 5 plaques à 96 puits étiquetés comme 0 h, 24 hr, 48 h, 72 h et 96 h. Ajouter 50 pi de 5 x 10 4 cellules / ml des solutions de cellules (TE 71 et A549) dans les puits comme indiqué dans le tableau 2, l'ensemencement ainsi 2500 cellules / puits. Faites la même procédure pour les lignées cellulaires OVCAR3 et MDA-MB-231.
    4. Après 24 h laver les puits avec du DPBS 1x et ajouter 50 ul de concentrations croissantes de nanoparticules dans les puits comme indiqué dans le tableau 2. Préparer différentes concentrations de nanoparticules par addition de 20, 100, et 180 ul de suspension de nanoparticules à 2.4.2 DMEM à obtenir un volume final de 2 ml, ce qui donne des concentrations de nanoparticules de 0,4 x 10 -4 mg / ml, 2,0 x 10 -4 mg / ml, et 3,6 x 10 -4 mg / ml, respectivement. Chaque lignée cellulaire a triple pour chaque concentration de nanoparticules.
  2. Mesure de la viabilité cellulaire dans l'obscurité
    1. Ajouter 10 ul MTT à la plaque 0 h immédiatement après l'ajout de nanoparticules. Incuber la plaque pendant 4 heures pour cryst formazanals pour former. Ajouter la solution de solubilisation de 50 ul dans les puits. Incuber la plaque pendant 6 heures pour dissoudre les cristaux de formazan.
    2. Mesure de la viabilité cellulaire de la plaque de 0 h en enregistrant l'absorbance à 570 nm avec un lecteur de microplaque.
    3. Pour une plaque à 24 h, laver les cellules avec 1x DPBS et ajouter 50 médias ul dans chaque puits d'incubation après 24 h avec des nanoparticules. Ajouter MTT et de lire la plaque, comme expliqué en 4.2.1 et 4.2.2.
    4. Pour 48 h, 72 h et 96 h plaques, laver les cellules avec 1x DPBS et ajouter 50 médias ul dans les puits après 24 heures d'incubation avec des nanoparticules. Incuber les cellules pendant les périodes restantes.
    5. 4.2.5) Mesurer la viabilité cellulaire à des points de temps particuliers comme expliqué en 4.2.1 et 4.2.2.
    6. Recommencer l'expérience complète de 3 fois (n = 3)

5. Mesure de la viabilité cellulaire Après PDT

  1. Le comptage des cellules et la mise en culture dans des plaques à 96 puits.
    1. Étiqueter un ensemble de 9Plaques de 6 puits comme indiqué dans le tableau 3, à la fois pour les plaques TE 71 + A549 et OVCAR3 + MDA-MB-231 plaques. La disposition des plaques sera le même, comme indiqué dans 4.1.3.
    2. Ensemencer les plaques à 96 puits comme expliqué dans la section 4.1 avec la même disposition, comme indiqué dans le tableau 2 dans la section 4.1.2.
    3. Après 24 h ajouter des nanoparticules pour les plaques comme expliqué dans la section 4.1.4.
    4. 24 h après l'addition de nanoparticules laver les cellules avec du DPBS 1x et ajouter 50 ul de HBSS à chaque puits.
    5. Irradier les plaques avec les doses de lumière respectifs, comme expliqué au paragraphe 3.2.3.
    6. Remplacer la HBSS avec 50 ul du milieu DMEM supplémenté avec 10% de FBS et on incube les plaques pendant les périodes de temps respectives après la PDT.
    7. Après chaque période de temps de mesurer la viabilité cellulaire comme expliqué en 4.2.1 et 4.2.2.

6. microscopie à fluorescence

  1. L'absorption de nanoparticules
    1. Allumer les lampes du microscope une le laser 30 min avant l'imagerie. Mettez la boîte de Pétri contenant les cellules fixes (comme expliqué dans la section 3.1) sur la scène du microscope.
    2. Recueillir la fluorescence de nanoparticules et DAPI en utilisant des filtres comme indiqué dans le tableau 4. Superposez le contraste de phase, nanoparticules et images DAPI dans le logiciel ImageJ.
  2. Détection de ROS
    1. Allumer les lampes du microscope 30 minutes avant l'imagerie. Mettez la boîte de Pétri contenant les cellules (comme expliqué dans la section 3.2) sur la scène du microscope.
    2. Recueillir la fluorescence de nanoparticules, DAPI et le réactif de détection ROS en utilisant des filtres comme indiqué au tableau 4. Superposer le contraste de phase, nanoparticule, DAPI et les images ROS de réactif de détection dans le logiciel ImageJ.
  3. Apoptose et la nécrose par PI et l'annexine V FITC
    1. Allumer les lampes du microscope 30 minutes avant l'imagerie. Mettez la boîte de Pétri contenant les cellules (comme expliqué danssection 3.3) sur la scène du microscope.
    2. Recueillir la fluorescence de nanoparticules, DAPI, PI, et Annexin V FITC en utilisant des filtres comme indiqué dans le tableau 4. Superposez le contraste de phase, nanoparticule, DAPI, PI et les images Annexin V FITC dans le logiciel ImageJ.

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Résultats

L'absorption et la cytotoxicité intrinsèque de nanoparticules

Les 50% en poids de nanoparticules mélangées MEH-PPV / PCBM ont été incubées avec TE 71, MDA-MB-231, A549 et des lignées cellulaires OVCAR3. Le niveau PCBM de mélange a été choisi comme 50% PCBM, qui a été montré pour fournir des propriétés de charge et de transfert d'énergie idéale entre les polymères et les fullerènes 14 conjugués. Images de fluorescence de nanoparticules absorption sont présentés dans

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Discussion

Pour atteindre nanoparticule absorption, il était nécessaire de maintenir certaines mesures critiques tout en fabrication des nanoparticules. Une solution IM 10 -6 MEH-PPV (mélangé avec 50% en poids PCBM) dans du THF a été préparé pour l'injection dans de l'eau DI, comme il a été observé que la concentration de cette solution joue un rôle important dans la détermination de la taille des nanoparticules est formée. La concentration a été vérifiée par spectroscopie UV-vis. Notez que dans l'étape de p...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Les auteurs remercient la National Science Foundation (NSF) pour le soutien financier de ce travail par le biais d’une bourse CAREER (CBET-0746210) et d’une bourse CBET-1159500. Nous tenons à remercier le Dr Turkson (Centre de cancérologie de l’Université d’Hawaï) et le Dr Altomare (Collège de médecine de l’Université de Floride centrale) pour leur aide avec la culture cellulaire.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Poly[2-méthoxy-5-(2-éthylhexyloxy)-1,4-phénylènevinylène] (MEH-PPV)Sigma Aidrich536512-1Gmoyenne Mn/nbsp ; 150 000-250 000
[6,6]-phényle C61  ; ester méthylique d’acide butyrique (PCBM)Sigma Aidrich684449-500MG>99.5 %
Tétrahydrofurane (THF)EMDTX0284-6Drisolv
1 ml seringueNational Scientific Company37510-1Pour la filtration de la solution MEH-PPV
Filtre à seringueVWR28145-49525 mm, 0.2 µ ; m, Seringue en PTFE
1 mlHamilton Company81320Pour l’injection d’une solution MEH-PPV dans l’eau pour fabriquer des nanoparticules
Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium/Ham’s F-12 50/50 Mix (DMEM)Corning (VWR)45000-350
Hank’s Balanced Salt Solution sans rouge de phénol (HBSS)Qualité biologique (VWR)10128-740
Solution saline tamponnée au phosphate Dulbecco, 1x sans calcium ni magnésium (DPBS)Corning (VWR)45000-436
Sérum fœtal de bovin, régulier (inactivé par la chaleur) (FBS)Corning (VWR)45000-736
Trypsine EDTA 1x 0,25Corning (VWR)45000-664Trypsine/2,21 mM EDTA dans HBSS sans bicarbonate de sodium, calcium et magnésium Parvovirus porcin testé
16 % ParaformaldéhydeSciences de la microscopie électronique  ;1571016 % de paraformaldéhyde est dilué à 4 % par ajout de PBS
DAPI&nbsp ; Biotium VWR89139-054Coloration nucléaire
Pipettes 5 mlVWR82050-478
75 cm2 Flacon de cultureVWR82050-856pour l’élevage
de cellules Plaques à 96 puitsVWR82050-771pour essais MTT
Boîtes de culture tissulaire avec éventsGreiner Bio-One (VWR)82050-538
Iodure de propidiumSondes moléculairesP3566
Annexine V FITCColorant InvitrogenA13199pour l’apoptose
Celltiter 96 non-R 1000 dosagesPromega (VWR)PAG4000MTT
CellROX Green Reagent, pour la détection du stress oxydatifInvitrogenC10444Pour ROS Spectromètre
UV-visde détection Agilent 8453
Spectromètre de fluorescenceNanoLog HoribaJobin Yvon
Diffusion dynamique de la lumièrePD2000DLS, Détecteur
IncubateurNuAir DH Microscope confocal à flux
Zeiss Axioskop263X lentille d’objectif à immersion dans l’huile
Microscope à épiluminescenceOlympus IX7160X objectif à immersion dans l’eau, Andor Zyla caméra sCMOS
Simulateur solaireNewport 67005 Oriel Instruments
Référence cellule solaireOriel  ;VLSI Standards Incorporated
Lecteur de microplaquesBioTek Ex808
HémocytomètreHausser Scientific Partnership3200Pour le comptage de cellules
 %de précisionautomatique

Références

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  3. Ferrari, M. Cancer nanotechnology: Opportunities and challenges. Nat Rev Cancer. 5 (3), 161-171 (2005).
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