Analyse de recrutement de cellules de tumeur pulmonaire

Résumé

Cet article décrit une méthode pour quantifier l’accumulation de cellules de tumeur dans les poumons dans un modèle animal de métastases tumorales.

Résumé

Afin d’étudier les mécanismes moléculaires qui régissent les métastases tumorales, divers essais à l’aide de la souris comme animal modèle ont été proposées. Nous démontrons ici, un simple test pour évaluer l’extravasation de cellules tumorales ou micrométastase. Dans ce test, les cellules tumorales ont été injectées dans la veine de la queue, et après une courte période, les poumons ont été disséqués et digérés pour compter les cellules tumorales marquées accumulés. Ce dosage saute l’étape initiale de l’invasion de la tumeur primitive dans le vaisseau sanguin et facilite l’étude des événements dans l’organe lointain où se produit la métastase tumorale. Le nombre de cellules injectées dans le vaisseau sanguin peut être optimisé afin d’observer un nombre limité de métastases. Il a été signalé que les cellules du stroma dans des organes éloignés contribuent à métastases. Ainsi, cet essai pourrait être un outil utile pour étudier les éventuels médicaments ou dispositifs pour la prévention des métastases tumorales.

Introduction

Métastase tumorale représente une mortalité élevée dans les maladies liées au cancer. Du point de vue des enquêtes au niveau moléculaire, les métastases peuvent être divisés en plusieurs étapes : initiation tumorale sur le site de la tumeur primitive, la croissance de la tumeur primitive et l’invasion en entourant les tissus, intravasation, circulation dans les vaisseaux sanguins , l’extravasation à des organes éloignés et re-croissance de la tumeur. Chaque étape consiste à différents ensembles de molécules/signaux¹.

Études à ce jour ont porté sur les événements qui se produisent dans des organes éloignés avant de co....

Protocole

Toutes les procédures effectuées sur des souris ont été approuvées par Medical University de l’Animal Research Committee of Tokyo Women.

1. queue Injection dans la veine des cellules de poumon de Lewis carcinome (LLC)

1. Maintenir les cellules LLC en DMEM additionné de 10 % FCS, dans un humidifié 5 % CO₂ incubateur à 37 ° C. Cellules doivent contenir un système d’expression de protéine fluorescente (p. ex., GFP).
2. Éliminer les cellules de la boîte de pétri en utilisant un réactif de dissociation cellulaire non enzymatiques. Suivre le protocole du fabricant.
3. Prélever des cellules dans un tube de ....

Résultats

Les poumons présentent plusieurs cellules de GFP-LLC 2 h après l’injection (Figure 1 a). Il est à noter que les taches fluorescentes également détectés dans le filtre rouge devraient être exclus du nombre nombre d’éléments. La grande majorité des cellules LLC disparaître des poumons 24 h après l’injection (Figure 1).

Pour confirmer le nombre de la GFP-SARL dans les poum.......

Discussion

Prétraitement des souris avec des anticorps, de drogues, une alimentation riche en graisses ou milieu conditionné par tumeur avant l’injection de cellules tumorales est possible. L’étape la plus difficile dans cet essai est l’injection dans la veine queue. Injection incomplète se traduit par des données non concluantes. La veine caudale C57BL/6 est particulièrement difficile à identifier, résultant en des injections a échoué. Placer les souris sur un coussin chauffant (37 ° C) aide à dilate la veine caudale afin que l’in.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Collagénase	Sigma	C6885
Dispase	Gibco	17105-041
Albumine sérique bovine	Sigma	A7030
DPBS	Gibco	14190-144	sans calcium, sans magnésium
Désoxyribonucléase I	Sigma	DN-25	trace de
globules rouges tampon de lyse	Sigma	R7757
Filtre à cellules	BD	352340	40 micromètres mesh
Kit de marquage par fluorescence	Sigma	MIN26-KIT
DMEM	Gibco	11965-092
0.22 &mu ; m filtre à seringue	sartorius	17597K
O.C.T. composé	Sakura Finetek	4583
4 % Paraformaldéhyde Phosphate Buffer Solution	Wako	163-20145